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Lord1990_

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞技术求助 已有1人参与

请各位高手帮我看看，我这是外周血提取的单个核细胞，最底层的是什么东西啊？谢谢

细胞技术求助
显微镜下的细胞.jpg
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1楼 2015-06-10 16:29:53
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雪痕

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

图片真心不清楚
首先得确认下你是用什么培养的，三层瓶还是别的什么
第二，是否是血小板或者别的细胞，比如单核细胞等等
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2楼2015-06-17 10:52:28
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Lord1990_

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 雪痕 at 2015-06-17 10:52:28
图片真心不清楚
首先得确认下你是用什么培养的，三层瓶还是别的什么
第二，是否是血小板或者别的细胞，比如单核细胞等等

我提取的是外周血单核细胞，体外进行培养，现在不了解现在培养瓶里的到底是不是单核细胞，请教您一下，希望得到你的帮助，谢谢，这是我最近拍的图片，
细胞技术求助-1
IMG_20150624_153116.jpg
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3楼2015-06-25 09:03:43
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雪痕

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Lord1990_ at 2015-06-25 09:03:43
我提取的是外周血单核细胞，体外进行培养，现在不了解现在培养瓶里的到底是不是单核细胞，请教您一下，希望得到你的帮助，谢谢，这是我最近拍的图片，

IMG_20150624_153116.jpg
...

仅镜下来看，应该悬浮的居多，从形状和状态看，部分为单核细胞，也有部分淋巴细胞，当然还有别的细胞成分
再者，你这是外周血提取后培养多长时间的照片，第0天（提取当日算）还是第4天等等，有时添加完某些因子后，细胞会在发生贴壁后重新悬浮起来。
准确的鉴定单核细胞，可以做一下流式鉴定
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4楼2015-06-25 09:53:06
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Lord1990_

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 雪痕 at 2015-06-25 09:53:06
仅镜下来看，应该悬浮的居多，从形状和状态看，部分为单核细胞，也有部分淋巴细胞，当然还有别的细胞成分
再者，你这是外周血提取后培养多长时间的照片，第0天（提取当日算）还是第4天等等，有时添加完某些因子后 ...

在镜下看，贴壁的较多，这是我养7天以后的图片，而我什么都没加，有老师说，我得加入M-CSF或是pma等诱导因子才能让其分化，我不了解这方面的内容，请问是这样么？还有单核细胞能贴壁么？有人认为是分化为巨噬细胞后才能贴壁和传代，还有分化后的单核细胞能传几代啊，非常感谢！！！
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5楼2015-06-25 10:24:56
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Lord1990_

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 雪痕 at 2015-06-25 09:53:06
仅镜下来看，应该悬浮的居多，从形状和状态看，部分为单核细胞，也有部分淋巴细胞，当然还有别的细胞成分
再者，你这是外周血提取后培养多长时间的照片，第0天（提取当日算）还是第4天等等，有时添加完某些因子后 ...

我的是养7天后的细胞，而且我在晃动培养瓶的时候，贴壁的较多，有几个问题请教，希望您能帮助，一，单核细胞在体外不加诱导因子如M-CSF的情况下能自己分化为巨噬细胞么？二，单核细胞在体外能传代么，能传几代，能否贴壁。
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6楼2015-06-25 10:28:41
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雪痕

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by Lord1990_ at 2015-06-25 10:28:41
我的是养7天后的细胞，而且我在晃动培养瓶的时候，贴壁的较多，有几个问题请教，希望您能帮助，一，单核细胞在体外不加诱导因子如M-CSF的情况下能自己分化为巨噬细胞么？二，单核细胞在体外能传代么，能传几代，能 ...

GM-CSF等因子会对单核细胞的分化有影响，到现在为止，我不明确你提取单核细胞的目的是什么，是为了诱导分化成巨噬细胞还是什么，单核细胞我还没有进行传代实验，只是做过淋巴细胞如CIK的传代，具体的传代数要根据细胞的状态和传代的频率等等来决定，至于是否贴壁，你可以做实验尝试下，每个人做的结果可能都不一样
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7楼2015-06-25 10:37:38
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Lord1990_

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 雪痕 at 2015-06-25 10:37:38
GM-CSF等因子会对单核细胞的分化有影响，到现在为止，我不明确你提取单核细胞的目的是什么，是为了诱导分化成巨噬细胞还是什么，单核细胞我还没有进行传代实验，只是做过淋巴细胞如CIK的传代，具体的传代数要根据细 ...

我的实验是这样的，用MSU（单钠尿酸盐）刺激外周血的单核细胞，检测不同剂量下的MSU对细胞刺激后，细胞中某些蛋白的表达变化，首先，我要验证MSU怎样的刺激细胞的，就是探讨细胞的吞噬作用，那么细胞就应该是吞噬细胞。我所看到的文献上说用的是THP-1细胞株，而我直接是从外周血提取的，是原代细胞，有人说外周血中的细胞是终末分化细胞，不能传代和分化的，所以遇到了上述的种种问题。
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8楼2015-06-25 13:50:27
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