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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR污染
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惊叹号

金虫 (正式写手)

[求助] PCR污染 已有8人参与

最近PCR老是出现假阳性，请大家帮忙分析一下。
我第一次扩的时候，反复摸了好多个温度，都没有扩出来，重新提RNA后一次就扩出来了，但是问题是，从此以后，每次扩增任何模版都是阳性，甚至不加模版也能扩出目的条带，更换了水、枪头、Ep管，重新稀释引物后再扩，还是存在假阳性，Mix也是新的，所以就迷茫了。。。
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1楼 2015-06-07 20:06:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
惊叹号: 金币+5, ★有帮助, 可能是我在那个实验室构建并提过阳性质粒，所以可能整个实验室都污染了。 2015-06-07 20:24:38
建议LZ换一把新的移液枪再试一次，如果还不行到其他实验室找个认识的人带加一次样。

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大家相互帮助哈
4楼2015-06-07 20:15:33
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慕慕123

新虫 (小有名气)
今天上实验老师刚刚解释过，可是我们做的是DNA。。

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2楼2015-06-07 20:12:04
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慕慕123

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-06-08 13:25:11
原理我弄错了，楼楼，见谅，刚刚做分子生物实验←_←，我回去特意去翻看了一下专业书，PCR会出现假阳性，第一种出现了不需要的目的带，这种情况下，可能是a,引物设计不合适，选择的扩增序列与非目的的扩增序列有同源性，所以进行PCR扩增时，扩增的PCR产物为非目的性的序列b,引物或者靶序列太短。，也容易出现假阳性，c,操作过程中出现污染，或者程序设置问题~_~第二种出现了，非特异性扩增带，原因和上面差不多，只是多了一个引物产生令人二聚体的。

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9楼2015-06-08 10:54:55
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换台PCR仪，或者你PCR不加荧光探针的引物，直接电泳看看条带大小。
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采菊东篱下，悠然见南山。
14楼2015-06-09 10:48:23
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普通回帖

惊叹号

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 慕慕123 at 2015-06-07 20:12:04
今天上实验老师刚刚解释过，可是我们做的是DNA。。

PCR扩增的都是DNA
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3楼2015-06-07 20:13:45
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惊叹号

金虫 (正式写手)
明天先将台子用紫外照一下再试试
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5楼2015-06-07 20:25:22
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慕慕123

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 惊叹号 at 2015-06-07 20:13:45
PCR扩增的都是DNA...

你确定楼主做的不是反转录PCR!

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6楼2015-06-08 06:26:24
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慕慕123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 惊叹号 at 2015-06-07 20:13:45
PCR扩增的都是DNA...

不是还可以用来扩增特定的RNA序列吗？

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7楼2015-06-08 06:31:04
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yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
惊叹号: 金币+5, ★有帮助, 换了个位置，上午把所有枪，还有能照的东西都用紫外照了，仍然无济于事。 2015-06-08 14:51:00
换个地方，换把枪呢？
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努力打败一切
8楼2015-06-08 09:49:22
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惊叹号

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yangjingjing at 2015-06-08 09:49:22
换个地方，换把枪呢？

换了个位置，上午把所有枪，还有能照的东西都用紫外照了，仍然无济于事
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10楼2015-06-08 17:17:49
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