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PCR污染 已有8人参与
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最近PCR老是出现假阳性，请大家帮忙分析一下。 我第一次扩的时候，反复摸了好多个温度，都没有扩出来，重新提RNA后一次就扩出来了，但是问题是，从此以后，每次扩增任何模版都是阳性，甚至不加模版也能扩出目的条带，更换了水、枪头、Ep管，重新稀释引物后再扩，还是存在假阳性，Mix也是新的，所以就迷茫了。。。 |
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luwei13566
木虫 (正式写手)
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4楼2015-06-07 20:15:33
2楼2015-06-07 20:12:04
【答案】应助回帖
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-06-08 13:25:11
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-06-08 13:25:11
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原理我弄错了，楼楼，见谅，刚刚做分子生物实验←_←，我回去特意去翻看了一下专业书，PCR会出现假阳性，第一种出现了不需要的目的带，这种情况下，可能是a,引物设计不合适，选择的扩增序列与非目的的扩增序列有同源性，所以进行PCR扩增时，扩增的PCR产物为非目的性的序列b,引物或者靶序列太短。，也容易出现假阳性，c,操作过程中出现污染，或者程序设置问题~_~第二种出现了，非特异性扩增带，原因和上面差不多，只是多了一个引物产生令人二聚体的。 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
9楼2015-06-08 10:54:55
781055707
木虫 (著名写手)
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14楼2015-06-09 10:48:23
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7楼2015-06-08 06:31:04
yangjingjing
木虫 (正式写手)
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8楼2015-06-08 09:49:22
10楼2015-06-08 17:17:49
