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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 一个关于跑SDS-PAGE中遇到的问题！
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lvpeng_ujs

新虫 (小有名气)

[交流] 一个关于跑SDS-PAGE中遇到的问题！

目前在做一个基因的原核表达并做抗体，但是在纯化蛋白的过程中发现挂不上HIS的柱子，于是决定用跑SDS-PAGE回收蛋白的方法做抗体。

为了提高胶的利用率，我在第一批样跑到一半后又点了一次样，结果跑完胶染色后发现条带有些乱，似乎第二次点的样的一些蛋白跑过了本身的溴酚蓝的指示带，进入了第一次点样的区域，请问各位有没有可能蛋白会跑得快过溴酚蓝的指示带？我的跑胶可能是哪些原因导致的呢？
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1楼 2008-07-22 19:34:18
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jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
挂不上柱可以用疏水或者离子交换试试看啊，你做制备型电泳要用厚点的胶比较好吧
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3楼2008-07-23 14:37:42
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
小分子蛋白快过溴酚蓝是绝对有可能的
你可以去查查一些技术资料
貌似promega还是takara的商品目录的附录就有写燃料在SDS-PAGE中相当于多少个kDa的蛋白

其实如果你想用这种方法回收蛋白的话
1、用更厚的玻璃板、更宽的梳子制胶
2、不要等第一次加样的蛋白跑了一半再上第二次，其实可以是上完一次，跑一点点进胶，然后继续上，这样效果估计好一点。（联想起做western的时候，蛋白表达量很低，就用分次上样的方法，就是上一点跑一点）
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2楼2008-07-22 19:59:38
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