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lvpeng_ujs

新虫 (小有名气)

[交流] 一个关于跑SDS-PAGE中遇到的问题!

目前在做一个基因的原核表达并做抗体,但是在纯化蛋白的过程中发现挂不上HIS的柱子,于是决定用跑SDS-PAGE回收蛋白的方法做抗体。

为了提高胶的利用率,我在第一批样跑到一半后又点了一次样,结果跑完胶染色后发现条带有些乱,似乎第二次点的样的一些蛋白跑过了本身的溴酚蓝的指示带,进入了第一次点样的区域,请问各位有没有可能蛋白会跑得快过溴酚蓝的指示带?我的跑胶可能是哪些原因导致的呢?
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
小分子蛋白快过溴酚蓝是绝对有可能的
你可以去查查一些技术资料
貌似promega还是takara的商品目录的附录就有写燃料在SDS-PAGE中相当于多少个kDa的蛋白

其实如果你想用这种方法回收蛋白的话
1、用更厚的玻璃板、更宽的梳子制胶
2、不要等第一次加样的蛋白跑了一半再上第二次,其实可以是上完一次,跑一点点进胶,然后继续上,这样效果估计好一点。(联想起做western的时候,蛋白表达量很低,就用分次上样的方法,就是上一点跑一点)
2楼2008-07-22 19:59:38
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jasco

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
挂不上柱可以用疏水或者离子交换试试看啊,你做制备型电泳要用厚点的胶比较好吧
3楼2008-07-23 14:37:42
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