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tongqingjia

铜虫 (小有名气)

[求助] 5×loading buffer 会与含有EDTA的蛋白质液反应么? 已有1人参与

各位虫友,想请教一下,在处理蛋白样品(酸性环境,里面含有EDTA)时,加入loading buffer,溶液变成黄色,这是因为什么?
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
tongqingjia: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-06-01 13:13:05
颜色变黄更EDTA没关系
是你的样品太酸了。。。
通常在蛋白表达纯化实验中,溴酚蓝在pH低于3时会变黄,检查一下你样品的buffer,如果就只能这样,一定要用pH 6.8的Tris把pH调回来,溴酚蓝在大于4.6的时候就是蓝色的了,所以你可能需要多加一点Tirs。
不然的话,不连续SDS-PAGE浓缩分离完全依赖于pH,可能有影响。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
2楼2015-06-01 10:42:38
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tongqingjia

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-06-01 10:42:38
颜色变黄更EDTA没关系
是你的样品太酸了。。。
通常在蛋白表达纯化实验中,溴酚蓝在pH低于3时会变黄,检查一下你样品的buffer,如果就只能这样,一定要用pH 6.8的Tris把pH调回来,溴酚蓝在大于4.6的时候就是蓝色的 ...

非常感谢

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-06-01 13:13:26
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