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spiderbp

金虫 (正式写手)

[求助] 脂质体liposome制备时遇到的苦难,膜过滤问题 已有2人参与

请教大侠,
现在按Biacor (SPR仪器公司)的要求制作脂质体,用的是Avanti提供的lipid,滤膜和小过滤设备。
实验要求50nm滤膜,但我做的脂质体很难通过。给多大压力都不通过,压力过大膜就破掉了。

本实验步骤如下:
       称取76mg POPC溶于10ml氯仿,
       旋转蒸发蒸出氯仿,然后真空泵旋蒸2h。
       得到的一层薄膜用缓冲溶液溶解,混悬,
       放到液氮里冷冻,再解冻,反复5次。
       混悬液用注射器在过滤装置上透过50nm滤膜。
此时遇到问题,因为50nm根本过不去,我就先用100nm膜过滤,但还是过不去。像堵住了一样,使劲推也不进行最后膜就破掉了。
      1.以为是脂质体体积太大了,我就将混悬液稀释了3倍。
      2.想让脂质体均匀,我又用超声波超声了5min
但结果无济于事。

请有经验的大侠们告诉我一下,以上步骤是不是哪儿出了问题。或者该怎么做才对,谢谢大家!
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多糖合成
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hkumpsd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
spiderbp: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢啊 2015-06-07 10:27:50
引用回帖:
4楼: Originally posted by spiderbp at 2015-06-03 08:38:28
我的条件是10nM/ml POPC。感觉浓度好大啊。手册要求挤19-20次。现在手里没有400nm的膜,看来还得订。
你们是做什么试验用liposome啊?我是为了SPR用的。...

我们做药物控释的空白模型用的,实际操作一般是挤25-30次。不用400 nm也可以挤出来,但是会很吃力。
Fight for better life!
6楼2015-06-07 10:10:08
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hkumpsd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
spiderbp: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢啊 2015-06-07 10:28:10
先试一试400 nm的膜,再用更小尺寸的膜。我们用10 mgPOPC挤100 nm的也很吃力,一般要挤好多次。
Fight for better life!
2楼2015-06-01 13:36:03
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
spiderbp: 金币+2, ★★★很有帮助, 能不能再详细一点? 2015-06-07 10:28:37
实在不好过滤,请用分子筛层析。
3楼2015-06-01 13:40:16
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spiderbp

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hkumpsd at 2015-06-01 13:36:03
先试一试400 nm的膜,再用更小尺寸的膜。我们用10 mgPOPC挤100 nm的也很吃力,一般要挤好多次。

我的条件是10nM/ml POPC。感觉浓度好大啊。手册要求挤19-20次。现在手里没有400nm的膜,看来还得订。
你们是做什么试验用liposome啊?我是为了SPR用的。
多糖合成
4楼2015-06-03 08:38:28
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