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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 脂质体liposome制备时遇到的苦难，膜过滤问题
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spiderbp

金虫 (正式写手)

[求助] 脂质体liposome制备时遇到的苦难，膜过滤问题 已有2人参与

请教大侠，
现在按Biacor （SPR仪器公司）的要求制作脂质体，用的是Avanti提供的lipid，滤膜和小过滤设备。
实验要求50nm滤膜，但我做的脂质体很难通过。给多大压力都不通过，压力过大膜就破掉了。

本实验步骤如下：
       称取76mg POPC溶于10ml氯仿，
       旋转蒸发蒸出氯仿，然后真空泵旋蒸2h。
       得到的一层薄膜用缓冲溶液溶解，混悬，
       放到液氮里冷冻，再解冻，反复5次。
       混悬液用注射器在过滤装置上透过50nm滤膜。
此时遇到问题，因为50nm根本过不去，我就先用100nm膜过滤，但还是过不去。像堵住了一样，使劲推也不进行最后膜就破掉了。
      1.以为是脂质体体积太大了，我就将混悬液稀释了3倍。
      2.想让脂质体均匀，我又用超声波超声了5min
但结果无济于事。

请有经验的大侠们告诉我一下，以上步骤是不是哪儿出了问题。或者该怎么做才对，谢谢大家！
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多糖合成
1楼 2015-05-31 20:05:04
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hkumpsd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
spiderbp: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢啊 2015-06-07 10:28:10
先试一试400 nm的膜，再用更小尺寸的膜。我们用10 mgPOPC挤100 nm的也很吃力，一般要挤好多次。
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Fight for better life!
2楼2015-06-01 13:36:03
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
spiderbp: 金币+2, ★★★很有帮助, 能不能再详细一点？ 2015-06-07 10:28:37
实在不好过滤，请用分子筛层析。
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3楼2015-06-01 13:40:16
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spiderbp

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hkumpsd at 2015-06-01 13:36:03
先试一试400 nm的膜，再用更小尺寸的膜。我们用10 mgPOPC挤100 nm的也很吃力，一般要挤好多次。

我的条件是10nM/ml POPC。感觉浓度好大啊。手册要求挤19-20次。现在手里没有400nm的膜，看来还得订。
你们是做什么试验用liposome啊？我是为了SPR用的。
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多糖合成
4楼2015-06-03 08:38:28
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spiderbp

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-01 13:40:16
实在不好过滤，请用分子筛层析。

这个怎么弄，没听说过。能具体详细一点吗
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多糖合成
5楼2015-06-03 08:38:55
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hkumpsd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
spiderbp: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢啊 2015-06-07 10:27:50
引用回帖:
4楼: Originally posted by spiderbp at 2015-06-03 08:38:28
我的条件是10nM/ml POPC。感觉浓度好大啊。手册要求挤19-20次。现在手里没有400nm的膜，看来还得订。
你们是做什么试验用liposome啊？我是为了SPR用的。...

我们做药物控释的空白模型用的，实际操作一般是挤25-30次。不用400 nm也可以挤出来，但是会很吃力。
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Fight for better life!
6楼2015-06-07 10:10:08
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spiderbp

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hkumpsd at 2015-06-07 10:10:08
我们做药物控释的空白模型用的，实际操作一般是挤25-30次。不用400 nm也可以挤出来，但是会很吃力。...

确实是很吃力，花了几天得到了3毫升。后来弄的就不行了，液体从侧面漏出来了，好像是注射器和extruter的密封性不好了。
洗完器具以后我放干燥箱了，50度下我怀疑聚四氟乙烯会变形影响密封性了。
这个破实验很让人不顺心！
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多糖合成
7楼2015-06-07 10:27:35
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calorimetry

铜虫 (正式写手)
我去给你找本英文版的脂质体实验手册发给你吧。
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8楼2015-06-08 08:42:44
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hitjt

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-08 08:42:44
我去给你找本英文版的脂质体实验手册发给你吧。

能发我一份吗 不胜感激
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9楼2015-08-17 22:33:59
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