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spiderbp

金虫 (正式写手)

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[求助] 脂质体liposome制备时遇到的苦难，膜过滤问题已有2人参与

请教大侠，
现在按Biacor （SPR仪器公司）的要求制作脂质体，用的是Avanti提供的lipid，滤膜和小过滤设备。
实验要求50nm滤膜，但我做的脂质体很难通过。给多大压力都不通过，压力过大膜就破掉了。

本实验步骤如下：
   称取76mg POPC溶于10ml氯仿，
   旋转蒸发蒸出氯仿，然后真空泵旋蒸2h。
   得到的一层薄膜用缓冲溶液溶解，混悬，
   放到液氮里冷冻，再解冻，反复5次。
   混悬液用注射器在过滤装置上透过50nm滤膜。
此时遇到问题，因为50nm根本过不去，我就先用100nm膜过滤，但还是过不去。像堵住了一样，使劲推也不进行最后膜就破掉了。
   1.以为是脂质体体积太大了，我就将混悬液稀释了3倍。
   2.想让脂质体均匀，我又用超声波超声了5min
但结果无济于事。

请有经验的大侠们告诉我一下，以上步骤是不是哪儿出了问题。或者该怎么做才对，谢谢大家！

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