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guoqin_shiyin银虫 (正式写手)
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副溶血弧菌基因敲除蔗糖反向筛选长出的菌落很怪
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采用自杀载体敲除副溶的基因,第一次重组得到氯霉素抗性的重组子,第二次重组在10%蔗糖平板上长出来大个的像液滴一样的菌落,担心是污染,不涂布直接点接蔗糖平板,得到同样结果;该菌落在氯霉素平板不长,担心蔗糖浓度不对,做了浓度梯度,从7%一直到16%,每个平板上都是长出的这个样子的菌落,PCR无目的片段.这个菌落点接在科玛嘉平板,绝大部分都不长,长出的几个居然是蓝色的......真心无语了....明明第一轮重组得到的结合子科玛嘉点上去是紫红色的,可是经过一轮蔗糖平板,得到古怪菌落,点击科玛嘉又变成蓝色... 真心求助各位大神,到底是为什么? 怀疑污染的话,应该不太可能了,因为是反复划线纯化挑取单斑了......而且对第一轮得到的结合子也做了副溶的PCR鉴定,TDH,toxr基因都扩增出来了..... 这个水滴状的菌落会不会是SacB基因其实没丢,把菌搞死了? |
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