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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 副溶血弧菌基因敲除蔗糖反向筛选长出的菌落很怪
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

[求助] 副溶血弧菌基因敲除蔗糖反向筛选长出的菌落很怪

采用自杀载体敲除副溶的基因,第一次重组得到氯霉素抗性的重组子,第二次重组在10%蔗糖平板上长出来大个的像液滴一样的菌落,担心是污染,不涂布直接点接蔗糖平板,得到同样结果;该菌落在氯霉素平板不长,担心蔗糖浓度不对,做了浓度梯度,从7%一直到16%,每个平板上都是长出的这个样子的菌落,PCR无目的片段.这个菌落点接在科玛嘉平板,绝大部分都不长,长出的几个居然是蓝色的......真心无语了....明明第一轮重组得到的结合子科玛嘉点上去是紫红色的,可是经过一轮蔗糖平板,得到古怪菌落,点击科玛嘉又变成蓝色...


真心求助各位大神,到底是为什么?

怀疑污染的话,应该不太可能了,因为是反复划线纯化挑取单斑了......而且对第一轮得到的结合子也做了副溶的PCR鉴定,TDH,toxr基因都扩增出来了.....

这个水滴状的菌落会不会是SacB基因其实没丢,把菌搞死了?
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1楼 2015-05-27 11:22:34
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fashionboysz

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by fashionboysz at 2015-12-30 16:13:45
你好LZ，如果像你所说的因为渗透压太高而挂了的话，为什么我做的把水滴状的单菌落再在LBS板上划线，还能继续生长呢？最近一直苦恼sacB二次重组筛选问题。....

我用的LBS板即LB（无NaCl)+12%蔗糖的板
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8楼2015-12-30 16:16:53
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出去吃饭吧

金虫 (小有名气)

淑女
你好，我最近也想做基因敲出，请问你的自杀载体是从哪里买的呢？
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我爱旅行
2楼2015-06-16 15:05:51
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
现在确定确实是菌株因为渗透压太高有SACB基因而挂了...........
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4楼2015-06-17 15:04:38
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
可以用pds132载体敲除副溶

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2015-06-18 11:11:53
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