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louise0220

新虫 (正式写手)

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[求助] 颗粒污泥ROS含量测定

我最近想用化学荧光法（DCFH-DA染料）测定胞内的ROS含量，购买的是南京建成的试剂盒。说明书上的操作步骤是加入DCFH-DA（10μM）至培养基中，然后加入细胞，37℃孵育细胞30min-几个小时，然后清洗残余的探针，最后用PBS进行重悬后加入到96孔板中，用荧光酶标仪测定。现在有以下几个细节还不清楚：1、这样的操作，最后的数据是怎样表达，是荧光强度吗？由于我不同处理组中没法保证细胞浓度一致，用绝对荧光强度显然不合适。
2、我的样品不是常规的分散均匀的小细胞，而是达到mm级的颗粒污泥，如果这样的话肯定没法加入到酶标板内进行读数测定。我可不可以用匀浆器捣碎后再用超声破碎，离心后取上清液立即测定ROS，这样的话最终结果就用荧光强度/g蛋白来表示。现在不知道这种做法是否合适。
还请有经验的虫子多多指教啊。。。

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