| 查看: 5260 | 回复: 10 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
酵母双杂交 已有6人参与
|
|||
|
本人最近在做酵母双杂，用Y187和AH109菌株，转质粒PGBKT7和PGADT7.用的是热激转化方法： 1) 在1.5 mL预冷的离心管中加入100 ng转化的质粒（诱饵载体）DNA和10 μL已变性的10mg/mL的鲱鱼精DNA（Herring testes Carrier DNA）并充分混匀； 2) 加入100 μL酵母感受态细胞，轻轻混匀； 3) 加入600 μL PEG/LiAc溶液，轻轻震荡混匀后置于30℃热板上30 min，每10 min摇匀一次； 4) 加入70 μL DMSO，轻轻点到混匀； 5) 42℃热板上15 min，每5 min摇匀一次； 6) 冰上放置1-2min，12000 rpm离心15 s，去上清； 7) 加入1 mL YPD Plus Liquid Medium，高速离心15 s，去上清； 8) 加入1 mL 0.9% NaCl溶液，涂布于一缺平板SD/-Trp上，30℃培养，2-3天 现在出现的问题是SD/-Trp不长，转了好多次都不行，求有经验的朋友指导一二，不甚感激啦！ |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
星空物语星空» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有52人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
Neo2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2015-06-23 21:40:36
Neo2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2015-05-24 08:54:57
本草纲目0503
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2106.8
- 散金: 518
- 红花: 1
- 帖子: 485
- 在线: 76.4小时
- 虫号: 3936884
- 注册: 2015-06-23
- 性别: MM
- 专业: 蔬菜学与瓜果学
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-06-24 12:16:21
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-06-24 12:16:21
|
你好，我是根据clontech的说明书上来操作的，但酵母一直摇不起来。第一步挑一个酵母单菌落在YPDA液体培养基上培养8—12hr能长起来，可是在第二步转移5ul到新的YPDA培养基上培养16—20hr却总是不到规定的OD值。 有一次划线保存，发现在YPDA固体培养基上，AH109菌株变红，但相同的板上另一侧的Y187没有变红，难道是菌株老化变异吗？可是后来从别的实验室借来GOLD菌株仍然摇不起来。。。 这个问题已经困扰我很久了，耽误了两个月的时间，希望您能帮我分析一下，不胜感激！ |
3楼2015-06-23 18:43:55
本草纲目0503
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2106.8
- 散金: 518
- 红花: 1
- 帖子: 485
- 在线: 76.4小时
- 虫号: 3936884
- 注册: 2015-06-23
- 性别: MM
- 专业: 蔬菜学与瓜果学
5楼2015-06-24 11:39:14
10