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酵母双杂交 已有6人参与
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本人最近在做酵母双杂，用Y187和AH109菌株，转质粒PGBKT7和PGADT7.用的是热激转化方法： 1) 在1.5 mL预冷的离心管中加入100 ng转化的质粒（诱饵载体）DNA和10 μL已变性的10mg/mL的鲱鱼精DNA（Herring testes Carrier DNA）并充分混匀； 2) 加入100 μL酵母感受态细胞，轻轻混匀； 3) 加入600 μL PEG/LiAc溶液，轻轻震荡混匀后置于30℃热板上30 min，每10 min摇匀一次； 4) 加入70 μL DMSO，轻轻点到混匀； 5) 42℃热板上15 min，每5 min摇匀一次； 6) 冰上放置1-2min，12000 rpm离心15 s，去上清； 7) 加入1 mL YPD Plus Liquid Medium，高速离心15 s，去上清； 8) 加入1 mL 0.9% NaCl溶液，涂布于一缺平板SD/-Trp上，30℃培养，2-3天 现在出现的问题是SD/-Trp不长，转了好多次都不行，求有经验的朋友指导一二，不甚感激啦！ |
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5楼2015-06-24 11:39:14
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-06-24 12:16:21
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你好，我是根据clontech的说明书上来操作的，但酵母一直摇不起来。第一步挑一个酵母单菌落在YPDA液体培养基上培养8—12hr能长起来，可是在第二步转移5ul到新的YPDA培养基上培养16—20hr却总是不到规定的OD值。 有一次划线保存，发现在YPDA固体培养基上，AH109菌株变红，但相同的板上另一侧的Y187没有变红，难道是菌株老化变异吗？可是后来从别的实验室借来GOLD菌株仍然摇不起来。。。 这个问题已经困扰我很久了，耽误了两个月的时间，希望您能帮我分析一下，不胜感激！ |
3楼2015-06-23 18:43:55
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