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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA提取时，浓度4252.2，A260/280=1.99，但电泳跑不出RNA，原因是？
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依然自然

新虫 (小有名气)

[求助] RNA提取时，浓度4252.2，A260/280=1.99，但电泳跑不出RNA，原因是？ 已有10人参与

我在提取RNA时，取样0.1g，新鲜样品现磨，用的Trizol提取法。结果RNA的浓度可以，2.0>A260/280>1.8，A260/230>2.0。但跑胶时没有RNA出现，只有点样孔很亮，和DNA Marker条带（图1）。跑胶时采用点样体系：DNA Loading Buffer、DNA Marker、Gel stain（核酸染料）各2ul，上样量2ul。跑胶条件：U=100V、I 随意，时间12min。出现问题之后，我采用大电泳槽电泳，电泳条件为：U=220V、I 随意、时间15min。结果是RNA拖尾，DNA Marker更清楚（图2）。请问这种问题可能是由于什么原因造成的？谁有好主意接下来我该做些什么测试才能找出问题和解决问题？谢谢！

RNA提取时，浓度4252.2，A260/280=1.99，但电泳跑不出RNA，原因是？
图1.jpg


RNA提取时，浓度4252.2，A260/280=1.99，但电泳跑不出RNA，原因是？-1
图2.jpg
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生命就如旅行。。。。所以要一直笑着
1楼 2015-05-13 10:52:51
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kanqi123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 依然自然 at 2015-05-13 19:42:35
初提，很多不懂，就按程序走了一遍   看看哪里会错，后面好加以注意。你说的没提出来，是看胶就能看出来的是不？我提的步骤：
1.取0.1g新鲜叶片，液氮研磨，加1ml Trizol于研钵中，待快溶解时再研磨，后将研磨液移 ...

加了氯仿不要剧烈震荡，轻轻混匀就好（记得本科时，老师说提RNA要跟对自己女朋友一样，要温柔！），加了异丙醇之后室温静置，之后用75% 乙醇清洗，这个75%乙醇需要用无水乙醇和DEPC水现配现用，这时也不需要上下震荡，只需将白色沉淀轻轻弹起即可。最后风干时间不宜过长，一般5-10分钟。
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22楼2015-10-14 15:44:46
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
依然自然(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-15 19:33:49
加样孔很亮，应该是你的RNA中有杂蛋白污染。
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2楼2015-05-13 15:43:17
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依然自然

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-05-13 15:43:17
加样孔很亮，应该是你的RNA中有杂蛋白污染。

我提取的植物是一种多酚多糖的，听我师姐的意思是RNA被一种蛋白或者糖类包裹着，跑不出来，但她也不知道如何改进。请问如何有效的改进我的实验？  谢谢了！
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生命就如旅行。。。。所以要一直笑着
3楼2015-05-13 18:22:19
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
都没提出来，测OD有什么用

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-05-13 18:28:00
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