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依然自然

新虫 (小有名气)

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[求助] RNA提取时，浓度4252.2，A260/280=1.99，但电泳跑不出RNA，原因是？已有10人参与

我在提取RNA时，取样0.1g，新鲜样品现磨，用的Trizol提取法。结果RNA的浓度可以，2.0>A260/280>1.8，A260/230>2.0。但跑胶时没有RNA出现，只有点样孔很亮，和DNA Marker条带（图1）。跑胶时采用点样体系：DNA Loading Buffer、DNA Marker、Gel stain（核酸染料）各2ul，上样量2ul。跑胶条件：U=100V、I 随意，时间12min。出现问题之后，我采用大电泳槽电泳，电泳条件为：U=220V、I 随意、时间15min。结果是RNA拖尾，DNA Marker更清楚（图2）。请问这种问题可能是由于什么原因造成的？谁有好主意接下来我该做些什么测试才能找出问题和解决问题？谢谢！

图1.jpg

RNA提取时，浓度4252.2，A260/280=1.99，但电泳跑不出RNA，原因是？-1

图2.jpg

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生命就如旅行。。。。所以要一直笑着

1楼 2015-05-13 10:52:51

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kanqi123

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by 依然自然 at 2015-05-13 19:42:35
初提，很多不懂，就按程序走了一遍看看哪里会错，后面好加以注意。你说的没提出来，是看胶就能看出来的是不？我提的步骤：
1.取0.1g新鲜叶片，液氮研磨，加1ml Trizol于研钵中，待快溶解时再研磨，后将研磨液移 ...

加了氯仿不要剧烈震荡，轻轻混匀就好（记得本科时，老师说提RNA要跟对自己女朋友一样，要温柔！

），加了异丙醇之后室温静置，之后用75% 乙醇清洗，这个75%乙醇需要用无水乙醇和DEPC水现配现用，这时也不需要上下震荡，只需将白色沉淀轻轻弹起即可。最后风干时间不宜过长，一般5-10分钟。