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满小南

新虫 (初入文坛)

[求助] 使用离子对试剂后C18柱子岀峰异常 已有2人参与

第一次用离子对色谱(四丁基硫酸氢铵)测定ATP ADP和AMP,流动相A:0.01%四丁基硫酸氢铵 20mM 磷酸缓冲液 pH5.0,流动相 B: 0.01% 四丁基硫酸氢铵, 200mM 磷酸缓冲液 pH4.0,10%乙腈。 柱子是agilent XDB C18反相柱,色谱条件是70%A 梯度走到50%然后回到70%。刚开始三种物质分离效果很好,但测定一段时间后(约24h)突然就出现了问题,三种物质无法分开,并且在色谱柱上基本无保留,从进样到岀峰就1min(之前分别是5min 8min和12min)。应该是柱子的问题,但不知道该如何处理,请高手赐教。
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

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离子对试剂很伤色谱柱,其次你的流动相A和B盐浓度不一致,B相是A相的10倍(是否是笔误?),还有你的有机相比例在刚开始时为总比例的3%,是否太低。一般柱效降低不会有这么快。
归零
2楼2015-05-11 10:41:39
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满小南

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by klicking at 2015-05-11 10:41:39
离子对试剂很伤色谱柱,其次你的流动相A和B盐浓度不一致,B相是A相的10倍(是否是笔误?),还有你的有机相比例在刚开始时为总比例的3%,是否太低。一般柱效降低不会有这么快。

方法是按照文献中来的,没有笔误。文献中原有的色谱分离条件一开始有机相比例为0,有机相比例过低会影响柱校吗?现在我该如何清洗这跟柱子呢?
3楼2015-05-11 10:48:35
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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满小南: 金币+2 2015-05-12 14:13:10
你可能碰到了相坍塌。这在水含量高,而且流速低或为零时常出现。可以试试用高有机相,比方90%以上,低流速慢慢冲。以后再分析样品时注意每次走完一个序列停机前用50%有机相冲洗。另外注意离子对试剂很难冲干净,一般是专门一根柱子固定使用,不要混用。

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-05-11 12:24:30
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豆豆70902

铁虫 (初入文坛)

你好请问在吗?
我想问一下,你在进样品之前,有先用你的流动相冲珠子吗?这样会不会直接就让离子对交换到柱子上,还没用就影响柱效了啊
好好加油。。。
5楼2016-02-25 14:56:15
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