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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化问题，希望大家给我支支招，成分感谢
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
★ ★
黄xia: 金币+2, 谢谢 2015-05-14 09:04:15
本帖内容被屏蔽
31楼2015-05-13 16:32:10
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13808906306

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
黄xia: 金币+2, 呵呵，谢谢 2015-05-14 09:04:28
引用回帖:
9楼: Originally posted by 黄xia at 2015-05-11 10:53:41
左边是Marker,中间是空载，右边粗的那条带是表达的蛋白，从图上看说明是表达了的，挂柱的图当时由于想着没挂上，就忘拍了，所以图就不能上传了

图.png
...

Marker跑的很漂亮，赞一个。
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32楼2015-05-13 17:07:40
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810043138
33楼2015-05-13 17:44:39
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wwwemc

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★
黄xia: 金币+2, 谢谢 2015-05-14 09:04:45
祝福顺利
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34楼2015-05-13 17:55:43
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gengxin60
祝福
35楼2015-05-13 18:04:23
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wasxnbe
★ ★
黄xia: 金币+2, 呵呵，谢谢参与 2015-05-14 09:05:02
36楼2015-05-13 18:18:11
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lha123

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼上说的都不错，现总结一下：
1 确认一下设计的序列是否正确，有无移码现象；
2 可能存在标签被包被，也有可能蛋白之间形成聚体，建议加入一定量的还原剂（NI 柱 耐受范围内）
3 楼主说在非还原胶上目标条带很少，是不是蛋白之间有二硫键形成了多聚体，可有western检测一下
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加油！2015
37楼2015-06-03 16:42:14
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yelibio

捐助贵宾 (初入文坛)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
黄xia: 金币+2, 谢谢 2015-06-04 12:21:47
内容已删除
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38楼2015-06-03 16:46:43
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总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
黄xia: 金币+1 2015-10-27 09:41:10
一般标签蛋白纯化没见过不挂柱的，一般人家都是结合力太强洗不下来。如果不挂柱可能目的蛋白的(His)6标签在重折叠时没有位于蛋白质分子的表面上,可以考虑溶液环境（pH，离子强度，其他蛋白质分子，缓冲溶液类型，有关影响蛋白质分子表面的试剂等）的因素，可以通过增加所提的蛋白质样品的溶解度来解决；也可能一些蛋白质或DNA与带有(His)6标签的目的蛋白发生了非特异性相互作用；或者有比邻的组氨酸的污染蛋白质与Ni-NTA柱结合。楼主加油
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我好累，承受这个年纪不该有的帅！
39楼2015-10-26 16:08:16
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黄xia

金虫 (小有名气)
引用回帖:
39楼: Originally posted by 总有二狗咬朕 at 2015-10-26 16:08:16
一般标签蛋白纯化没见过不挂柱的，一般人家都是结合力太强洗不下来。如果不挂柱可能目的蛋白的(His)6标签在重折叠时没有位于蛋白质分子的表面上,可以考虑溶液环境（pH，离子强度，其他蛋白质分子，缓冲溶液类型，有 ...

谢谢您的回复，目前我的问题已经解决了，谢谢大家的关注
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40楼2015-10-27 09:40:31
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