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[交流]
关于cas9敲除的问题
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cas9靶位点可以设计成21个碱基吗，我们实验室准备用T7启动子，5‘端两个G，3’端结束后是NGG。看了网上和文献上大部分靶位点都是设计成20个碱基，但是也有说19到23个碱基都可以。20个碱基实在找不到靶点了，21个碱基的靶点还能找到一个，不知道能不能用。 大家对cas9有什么看法和经验都可以交流一下，据说脱靶效应很严重啊 |
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高山流水循
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问题1:gRNA长度18-22吧，大致范围，有专门文献的，你看一下。这东西类似引物，没必要非得20。至于为什么文献大都是20bp，是因为最开始在酿脓杆菌发现的是20个，最早发现所以最多使用而已，你完全可以改变长度的。有的网站设计的可以不是20.第二个问题：G可加可不加，张峰实验室推荐加，因为真核细胞启动子转录起始位点为G，但是很多实验发现不加或开头不是G不影响打靶效率。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-04-27 04:06:09
5楼2016-04-27 06:32:57
