北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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myshl1989

金虫 (初入文坛)

[求助] 有必要用FPLC么? 已有1人参与

请教下各位虫友,我找外包公司表达一个酶原,随后再激活成酶(文献上这个步骤,直接表达酶怕没有活性)。他现在跟我说,先纯化酶原,激活后再纯化相应的酶,必须用到FPLC的纯化工作站(AKATA),因为激活后的酶原就丢掉了标签蛋白,所以还要加钱,有这样的必要么?
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

蛋白有很多柱子可以过,也不是非要上FPLC,还是看操作的环境和人吧。
行至水穷处,坐看云起时
4楼2015-04-22 12:27:52
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myshl1989: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-04-22 10:21:49
问的问题有点不清晰,是不是如果不用FPLC就便宜一点,因为有tag可以用来亲和层析?

如果激活后,tag就随之切掉了,要重新纯化,必须用FPLC, 价格就贵了?

用FPLC纯化肯定重复性,可控性要好,如果用于体外实验,可以不那么严格,如果用于细胞,动物实验,建议还是用FPLC好一些。
行至水穷处,坐看云起时
2楼2015-04-22 10:17:38
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myshl1989

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2015-04-22 10:17:38
问的问题有点不清晰,是不是如果不用FPLC就便宜一点,因为有tag可以用来亲和层析?

如果激活后,tag就随之切掉了,要重新纯化,必须用FPLC, 价格就贵了?

用FPLC纯化肯定重复性,可控性要好,如果用于体外实验 ...

你好 ,是你表达的意思,我下游想做蛋白质结合的实验。尽量不用FPLC,但怕亲和层析后没活性
3楼2015-04-22 10:23:17
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myshl1989

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by pennchem at 2015-04-22 12:27:52
蛋白有很多柱子可以过,也不是非要上FPLC,还是看操作的环境和人吧。

那可以把标签加在激活后不丢失的那一端,然后按正常的亲和纯化步骤来,可以吧,主要是经费考虑
5楼2015-04-22 16:10:10
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