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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 有必要用FPLC么？
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myshl1989

金虫 (初入文坛)

[求助] 有必要用FPLC么？ 已有1人参与

请教下各位虫友，我找外包公司表达一个酶原，随后再激活成酶（文献上这个步骤，直接表达酶怕没有活性）。他现在跟我说，先纯化酶原，激活后再纯化相应的酶，必须用到FPLC的纯化工作站（AKATA），因为激活后的酶原就丢掉了标签蛋白，所以还要加钱，有这样的必要么？
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1楼 2015-04-22 09:06:49
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myshl1989: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-04-22 10:21:49
问的问题有点不清晰，是不是如果不用FPLC就便宜一点，因为有tag可以用来亲和层析？

如果激活后，tag就随之切掉了，要重新纯化，必须用FPLC, 价格就贵了？

用FPLC纯化肯定重复性，可控性要好，如果用于体外实验，可以不那么严格，如果用于细胞，动物实验，建议还是用FPLC好一些。
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2015-04-22 10:17:38
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myshl1989

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2015-04-22 10:17:38
问的问题有点不清晰，是不是如果不用FPLC就便宜一点，因为有tag可以用来亲和层析？

如果激活后，tag就随之切掉了，要重新纯化，必须用FPLC, 价格就贵了？

用FPLC纯化肯定重复性，可控性要好，如果用于体外实验 ...

你好 ，是你表达的意思，我下游想做蛋白质结合的实验。尽量不用FPLC，但怕亲和层析后没活性
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3楼2015-04-22 10:23:17
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

蛋白有很多柱子可以过，也不是非要上FPLC，还是看操作的环境和人吧。
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行至水穷处，坐看云起时
4楼2015-04-22 12:27:52
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myshl1989

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by pennchem at 2015-04-22 12:27:52
蛋白有很多柱子可以过，也不是非要上FPLC，还是看操作的环境和人吧。

那可以把标签加在激活后不丢失的那一端，然后按正常的亲和纯化步骤来，可以吧，主要是经费考虑
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5楼2015-04-22 16:10:10
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yamd_hao

新虫 (初入文坛)
楼主FPLC项目在哪做的？ 谢谢
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6楼2021-07-13 17:33:48
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