24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1153  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zy-2014

木虫 (小有名气)

[求助] 质粒抽提 已有1人参与

各位师兄师姐,你们好!
    我接的前人师兄的课题,菌(DH5α)已经保存了将近3年了,一直保存在-80℃里,中途为未活化过,现在我活化了,在50ug/ml的Ampr上4天以后长出了一堆菌,观察其菌落形态,应该是细菌,我就划单菌落了,始终没有长出单菌落,我没办法,只好把这一堆菌接种于1ml的种子培养液中培养了24h,见离心管中LB培养基浑浊以后,再将其接种于50ml的LB中培养36h,然后用Promege的10T质粒提取试剂盒抽取质粒,但电泳检测以后,没有条带,只有一条类似于瀑布状的散带,点样孔还亮着,好像是蛋白质污染了,总之是没有提出来质粒。我是分子生物学的小喽喽,希望各位大神能够帮我分析分析,给出您们的意见和建议,谢谢您们!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by zy-2014 at 2015-04-23 17:50:00
LB中加不加抗性,加上抗性……?谢谢您。...

可以试试梯度,另外,注意一下你的质粒有没有需要注意的地方,比如培养温度之类
10楼2015-04-23 19:44:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

feng37ye

新虫 (初入文坛)

没有见到电泳图,单看描述推断,有可能提出质粒了,不过拖尾严重,蛋白等杂志未去除干净。建议看一下solusion I 和 II 是否失效,还有操作非常重要,时间也要掌握好。能养出单菌落最好还是从单菌落阔培

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2015-04-21 16:54:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zy-2014: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢您,希望我有难题了你还是可以给我解惑,真心谢谢您…… 2015-04-23 15:38:10
首先,培养那么长时间,抗性早已失效,无法保证是不是杂菌,其次,大肠一般培养12小时应该就会长好,除非是质粒的问题。
3楼2015-04-21 20:34:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zy-2014

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by feng37ye at 2015-04-21 16:54:28
没有见到电泳图,单看描述推断,有可能提出质粒了,不过拖尾严重,蛋白等杂志未去除干净。建议看一下solusion I 和 II 是否失效,还有操作非常重要,时间也要掌握好。能养出单菌落最好还是从单菌落阔培
...

谢谢您……
4楼2015-04-23 15:18:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] B区0809 ,数一英一,290 求调剂 +4 泠潍1111 2026-04-12 5/250 2026-04-19 16:54 by 中豫男
[考研] 291求调剂 +12 关忆北. 2026-04-14 13/650 2026-04-19 16:50 by 中豫男
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +10 lzmk 2026-04-14 11/550 2026-04-19 16:42 by 中豫男
[考研] 327求调剂 +27 Xxjc1107. 2026-04-13 30/1500 2026-04-19 08:22 by cuisz
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 0854求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-15 27/1350 2026-04-19 01:59 by 烟雨流涯
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[考研] 一志愿沪9,生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[考研] 297,工科调剂? +10 河南农业大学-能 2026-04-14 10/500 2026-04-15 21:50 by noqvsozv
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
信息提示
请填处理意见