24小时热门版块排行榜    

查看: 1294  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zy-2014

木虫 (小有名气)

[求助] 质粒抽提 已有1人参与

各位师兄师姐,你们好!
    我接的前人师兄的课题,菌(DH5α)已经保存了将近3年了,一直保存在-80℃里,中途为未活化过,现在我活化了,在50ug/ml的Ampr上4天以后长出了一堆菌,观察其菌落形态,应该是细菌,我就划单菌落了,始终没有长出单菌落,我没办法,只好把这一堆菌接种于1ml的种子培养液中培养了24h,见离心管中LB培养基浑浊以后,再将其接种于50ml的LB中培养36h,然后用Promege的10T质粒提取试剂盒抽取质粒,但电泳检测以后,没有条带,只有一条类似于瀑布状的散带,点样孔还亮着,好像是蛋白质污染了,总之是没有提出来质粒。我是分子生物学的小喽喽,希望各位大神能够帮我分析分析,给出您们的意见和建议,谢谢您们!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zy-2014: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢您,希望我有难题了你还是可以给我解惑,真心谢谢您…… 2015-04-23 15:38:10
首先,培养那么长时间,抗性早已失效,无法保证是不是杂菌,其次,大肠一般培养12小时应该就会长好,除非是质粒的问题。
3楼2015-04-21 20:34:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

feng37ye

新虫 (初入文坛)

没有见到电泳图,单看描述推断,有可能提出质粒了,不过拖尾严重,蛋白等杂志未去除干净。建议看一下solusion I 和 II 是否失效,还有操作非常重要,时间也要掌握好。能养出单菌落最好还是从单菌落阔培

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2015-04-21 16:54:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zy-2014

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by feng37ye at 2015-04-21 16:54:28
没有见到电泳图,单看描述推断,有可能提出质粒了,不过拖尾严重,蛋白等杂志未去除干净。建议看一下solusion I 和 II 是否失效,还有操作非常重要,时间也要掌握好。能养出单菌落最好还是从单菌落阔培
...

谢谢您……
4楼2015-04-23 15:18:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zy-2014

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 浅语8905 at 2015-04-21 20:34:22
首先,培养那么长时间,抗性早已失效,无法保证是不是杂菌,其次,大肠一般培养12小时应该就会长好,除非是质粒的问题。

谢谢您……您觉得我的下一步应该怎么做呢?的确我的菌就长了快四天才长出来的……谢谢您……
5楼2015-04-23 15:19:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 6/300 2026-08-15 17:34 by 7huP8NPKZCp9
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +27 医学老男孩 2026-08-13 58/2900 2026-08-15 15:57 by GZUZM
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 3/150 2026-08-15 14:53 by QXtWNz7PI7wZ
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +7 majunge000 2026-08-11 9/450 2026-08-15 13:34 by kiz2011
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 3/150 2026-08-15 12:41 by KxMI1BYBxWX1
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 3/150 2026-08-15 12:33 by KxMI1BYBxWX1
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 HFw0lei2R37i 2026-08-14 9/450 2026-08-15 11:33 by KxMI1BYBxWX1
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 7lpolszZVXgi 2026-08-14 6/300 2026-08-15 09:28 by sunzitan
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
信息提示
请填处理意见