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zy-2014

木虫 (小有名气)

[求助] 质粒抽提 已有1人参与

各位师兄师姐,你们好!
    我接的前人师兄的课题,菌(DH5α)已经保存了将近3年了,一直保存在-80℃里,中途为未活化过,现在我活化了,在50ug/ml的Ampr上4天以后长出了一堆菌,观察其菌落形态,应该是细菌,我就划单菌落了,始终没有长出单菌落,我没办法,只好把这一堆菌接种于1ml的种子培养液中培养了24h,见离心管中LB培养基浑浊以后,再将其接种于50ml的LB中培养36h,然后用Promege的10T质粒提取试剂盒抽取质粒,但电泳检测以后,没有条带,只有一条类似于瀑布状的散带,点样孔还亮着,好像是蛋白质污染了,总之是没有提出来质粒。我是分子生物学的小喽喽,希望各位大神能够帮我分析分析,给出您们的意见和建议,谢谢您们!
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feng37ye

新虫 (初入文坛)

没有见到电泳图,单看描述推断,有可能提出质粒了,不过拖尾严重,蛋白等杂志未去除干净。建议看一下solusion I 和 II 是否失效,还有操作非常重要,时间也要掌握好。能养出单菌落最好还是从单菌落阔培

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2015-04-21 16:54:28
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普通回帖

浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zy-2014: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢您,希望我有难题了你还是可以给我解惑,真心谢谢您…… 2015-04-23 15:38:10
首先,培养那么长时间,抗性早已失效,无法保证是不是杂菌,其次,大肠一般培养12小时应该就会长好,除非是质粒的问题。
3楼2015-04-21 20:34:22
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zy-2014

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by feng37ye at 2015-04-21 16:54:28
没有见到电泳图,单看描述推断,有可能提出质粒了,不过拖尾严重,蛋白等杂志未去除干净。建议看一下solusion I 和 II 是否失效,还有操作非常重要,时间也要掌握好。能养出单菌落最好还是从单菌落阔培
...

谢谢您……
4楼2015-04-23 15:18:12
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zy-2014

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 浅语8905 at 2015-04-21 20:34:22
首先,培养那么长时间,抗性早已失效,无法保证是不是杂菌,其次,大肠一般培养12小时应该就会长好,除非是质粒的问题。

谢谢您……您觉得我的下一步应该怎么做呢?的确我的菌就长了快四天才长出来的……谢谢您……
5楼2015-04-23 15:19:57
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zy-2014

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by feng37ye at 2015-04-21 16:54:28
没有见到电泳图,单看描述推断,有可能提出质粒了,不过拖尾严重,蛋白等杂志未去除干净。建议看一下solusion I 和 II 是否失效,还有操作非常重要,时间也要掌握好。能养出单菌落最好还是从单菌落阔培
...

谢谢您……
6楼2015-04-23 15:23:19
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zy-2014

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by feng37ye at 2015-04-21 16:54:28
没有见到电泳图,单看描述推断,有可能提出质粒了,不过拖尾严重,蛋白等杂志未去除干净。建议看一下solusion I 和 II 是否失效,还有操作非常重要,时间也要掌握好。能养出单菌落最好还是从单菌落阔培
...

我的菌长了四天才出来,我划单菌落了,但是在有氨苄抗性的培养基上没有长出单菌落,只是在开始划的哪儿有一堆,其它地方就没长,很惆怅,我自己在显微观察,不是杆状,是球状,哎,真心谢谢您……
7楼2015-04-23 15:26:18
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浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by zy-2014 at 2015-04-23 15:19:57
谢谢您……您觉得我的下一步应该怎么做呢?的确我的菌就长了快四天才长出来的……谢谢您……...

先接在LB液体培养基中试试,看看长不长,如果长的话就可以划线看看
8楼2015-04-23 17:43:41
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zy-2014

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 浅语8905 at 2015-04-23 17:43:41
先接在LB液体培养基中试试,看看长不长,如果长的话就可以划线看看...

LB中加不加抗性,加上抗性……?谢谢您。
9楼2015-04-23 17:50:00
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浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by zy-2014 at 2015-04-23 17:50:00
LB中加不加抗性,加上抗性……?谢谢您。...

可以试试梯度,另外,注意一下你的质粒有没有需要注意的地方,比如培养温度之类
10楼2015-04-23 19:44:41
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