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gnijuhz

新虫 (初入文坛)

[求助] FISH 结果荧光信号不强,跪求如何优化FISH条件,拍出漂亮图片 已有2人参与

近期在做FISH,但是实验结果均存在荧光信号不强的问题。求:如何调整实验条件,优化实验结果?

杂交对象:生物膜样品
探针个数:3;分别用Cy3,Cy5和FITC标记,其中Cy3信号较强,其他两个较弱
杂交液成分:FA浓度35%(三种探针FA浓度不同,根据文献认为35%较合适),NaCl 浓度 5M,Tris/HCl (pH 8.0) 1M,SDS 10%(w/v)
杂交条件:46℃ 2-3h

杂交时间是否越长越好?
FISH 结果荧光信号不强,跪求如何优化FISH条件,拍出漂亮图片
Image131.jpg
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wangranchd

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-21 08:37:02
采用激光共聚焦显微镜拍照时,如果信号不强,可以加大进光的激光强度。
并不是杂交的时间越长越好,我们实验室要求控制在30min-1h,时间过长会导致其他非特征细菌也会荧光显色。
荧光效果很大程度上决定于你所购买的探针质量!
2楼2015-04-20 20:25:00
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匿名

用户注销 (小有名气)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-21 08:37:05
本帖仅楼主可见
3楼2015-04-21 01:58:27
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