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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » FISH 结果荧光信号不强，跪求如何优化FISH条件，拍出漂亮图片
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gnijuhz

新虫 (初入文坛)

[求助] FISH 结果荧光信号不强，跪求如何优化FISH条件，拍出漂亮图片 已有2人参与

近期在做FISH，但是实验结果均存在荧光信号不强的问题。求：如何调整实验条件，优化实验结果？

杂交对象：生物膜样品
探针个数：3；分别用Cy3,Cy5和FITC标记，其中Cy3信号较强，其他两个较弱
杂交液成分：FA浓度35%（三种探针FA浓度不同，根据文献认为35%较合适），NaCl 浓度 5M，Tris/HCl (pH 8.0) 1M，SDS 10%（w/v）
杂交条件：46℃ 2-3h

杂交时间是否越长越好？
FISH 结果荧光信号不强，跪求如何优化FISH条件，拍出漂亮图片
Image131.jpg
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1楼 2015-04-20 17:55:03
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wangranchd

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-21 08:37:02
采用激光共聚焦显微镜拍照时，如果信号不强，可以加大进光的激光强度。
并不是杂交的时间越长越好，我们实验室要求控制在30min-1h，时间过长会导致其他非特征细菌也会荧光显色。
荧光效果很大程度上决定于你所购买的探针质量！
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2楼2015-04-20 20:25:00
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匿名

用户注销 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-21 08:37:05
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3楼2015-04-21 01:58:27
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