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zwf0919木虫 (正式写手)
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问一些关于引物和RNA超弱的问题哈~~~已有2人参与
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偏材料方向的，为了做应用，不得不赶鸭子上架做点生物方面的东西了。我的问题可能很弱 ，希望大家多指点了，金币不够都可以加。过程呢就是用一个引物检测一段RNA序列，引物和RNA都是生物公司合成的，细节上好多就不明白了  ：1. 引物和RNA该怎么保存呢 我看有的帖子说引物用超纯水稀释了，放-20度，这个水里面要加抑制引物分解的东西吗，类似于RNase抑制剂的？还有，要不要用buffer稀释，文献里面貌似用的是引物的buffer溶液？ RNA说明书给的是用含DEPC-DW的buffer溶解后存于-20度。这DEPC-DW跟买的DEPC水是一样吗？还有，含DEPC-DW的buffer，是先把DEPC加到buffer里再灭菌，还是配个高点浓度的buffer灭完菌以后再用DEPC水稀释？ 2.引物和和RNA杂化的温度 我的引物是22个碱基，我查了一个公式是Tc=4 °C×(GC)+2×°C(AT)，这样算出来62 °C左右，靠谱吗？ 我看过一个文献用的双温度杂交的，target序列=probe序列+reporter序列，probe序列先跟target序列杂交的时候是42°C，target上剩下的序列再跟reporter序列杂交的时候是64°C，这个温度选择有没有什么讲究？ 3.操作环境 这个实验大概要怎样的环境条件，我们实验室有超净工作台，有高温灭菌。 我看文献上用了一个rotating hybridization incubator，直译过来就旋转杂交仪，这个我们没有，这个是不是必须的？我可以用其他的方法代替么，比如水浴控制温度什么的？ 艾玛问了好多  ，希望能有虫子不嫌烦，不吝赐教，谢谢！ |
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