| 查看: 1070 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
zwf0919木虫 (正式写手)
|
[求助]
问一些关于引物和RNA超弱的问题哈~~~ 已有2人参与
|
|
偏材料方向的，为了做应用，不得不赶鸭子上架做点生物方面的东西了。我的问题可能很弱 ，希望大家多指点了，金币不够都可以加。过程呢就是用一个引物检测一段RNA序列，引物和RNA都是生物公司合成的，细节上好多就不明白了  ：1. 引物和RNA该怎么保存呢 我看有的帖子说引物用超纯水稀释了，放-20度，这个水里面要加抑制引物分解的东西吗，类似于RNase抑制剂的？还有，要不要用buffer稀释，文献里面貌似用的是引物的buffer溶液？ RNA说明书给的是用含DEPC-DW的buffer溶解后存于-20度。这DEPC-DW跟买的DEPC水是一样吗？还有，含DEPC-DW的buffer，是先把DEPC加到buffer里再灭菌，还是配个高点浓度的buffer灭完菌以后再用DEPC水稀释？ 2.引物和和RNA杂化的温度 我的引物是22个碱基，我查了一个公式是Tc=4 °C×(GC)+2×°C(AT)，这样算出来62 °C左右，靠谱吗？ 我看过一个文献用的双温度杂交的，target序列=probe序列+reporter序列，probe序列先跟target序列杂交的时候是42°C，target上剩下的序列再跟reporter序列杂交的时候是64°C，这个温度选择有没有什么讲究？ 3.操作环境 这个实验大概要怎样的环境条件，我们实验室有超净工作台，有高温灭菌。 我看文献上用了一个rotating hybridization incubator，直译过来就旋转杂交仪，这个我们没有，这个是不是必须的？我可以用其他的方法代替么，比如水浴控制温度什么的？ 艾玛问了好多  ，希望能有虫子不嫌烦，不吝赐教，谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有226人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 提rna用的depc水（康润公司试剂盒）可以用来稀释引物吗
已经有5人回复
- microRNA实时定量PCR上游引物自身形成二聚物怎么办？
已经有6人回复
- 在哪里可以购买RNA引物
已经有4人回复
- 18S引物检测用oligo做接头的总RNA反转录的cDNA有道理吗
已经有2人回复
- PCR引物是DNA还是RNA呢？
已经有13人回复
zwf0919
木虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2124.4
- 散金: 3143
- 红花: 8
- 帖子: 668
- 在线: 187.6小时
- 虫号: 1147013
- 注册: 2010-11-15
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
3楼2015-04-14 15:39:16
hkqgeoffrey
金虫 (小有名气)
- 应助: 58 (初中生)
- 金币: 1351.4
- 散金: 3
- 红花: 2
- 帖子: 135
- 在线: 45.4小时
- 虫号: 2546967
- 注册: 2013-07-15
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
2楼2015-04-13 16:58:34
bbqlhb
木虫 (小有名气)
- 应助: 70 (初中生)
- 金币: 1818.6
- 红花: 11
- 帖子: 267
- 在线: 127.3小时
- 虫号: 3365870
- 注册: 2014-08-14
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2015-04-14 15:59:23
hkqgeoffrey
金虫 (小有名气)
- 应助: 58 (初中生)
- 金币: 1351.4
- 散金: 3
- 红花: 2
- 帖子: 135
- 在线: 45.4小时
- 虫号: 2546967
- 注册: 2013-07-15
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
5楼2015-04-15 08:49:30
