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求大神土壤硝酸还原酶测定方法
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最近在测定土壤硝酸还原酶，主要采用的方法是关松荫《土壤酶及其研究方法》中介绍的酚二磺酸比色法，测定过程中出现了一些问题一直导致实验失败，求大神们指导！！ 问题一，到底是用鲜样还是用风干样？书中介绍的是风干样，但是很多大牛审稿人一听到你测酶活用的是风干的土样直接就摇头，对此一直非常困惑，可能水分含量对土壤酶活的影响很大所以很多中国的文献都介绍用风干样，但土壤在风干过程中对酶活应该会造成很大的影响和损失吧？ 问题二，抽气后如何密封？书中介绍的方法是用“减压三角瓶抽气3分钟”，但实际操作中这一步实在是太难把握了，后来我订做了小号的抽滤三角瓶，用抽滤三角瓶抽气，然后抽气结束后迅速用保鲜膜封住抽滤口，但是还是感觉这一过程会漏入很多空气。 问题三，酚二磺酸处理后，用10%NaOH调色，几次实验最后都在这里失败了，调至微黄色，上分光光度计测定后吸光值比标线0点都低，调至明黄色，所有的处理又都是差不多的数值，感觉吸光值最后的高低完全是由比色液的颜色深浅决定的，那“用10%NaOH调色”调色这一步骤就非常难操作了，加入的NaOH多，比色液颜色深，吸光值高，NaOH少，数值就低。 问题四，书中介绍的方法在计算的时候的叙述是“硝酸还原酶活性，以24h后，10g土壤中被还原的硝态氮表示”，那我我想请问具体的计算公式是什么？是用处理-对照（灭菌土壤）么？ 求有经验的大神们指导啊！不甚感激！！ |
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