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新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 2308836
注册: 2013-03-01
专业: 病原细菌、细菌感染与宿主

[求助] 求指导三个月没有出来求各位大神指导

1.细胞裂解我用的RIPA裂解液强裂解的细胞半小时，加入了蛋白酶抑制剂 99比1
12%跑胶发现小分子蛋白条带很弱。目的蛋白HO-1 28KD
2 WB转膜MARKER可以看到转的很漂亮 NC膜 11V 14分钟，封闭 2，6,8,9小时都试过，一抗4度过夜，洗膜3次每次10分钟。2抗两小时，洗膜三次每次10分钟，有时一两小时，一抗1比500 1000都试过，二抗1比1000 2000也试过发现压片内参目的蛋白从来没有出来过
求大神指导
用丽春红染色转膜转上去了

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1楼 2015-04-11 21:05:47

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新虫 (正式写手)

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注册: 2014-11-10
性别: GG
专业: 免疫生物学

11V 14min，不知楼主后来问题有没有解决。。。最近15kD左右的蛋白一直出不来，200mA 25min, 30min , 60min都试过，因为开始内参也是出不来，后来调了电流就出来了，目的蛋白出不来。。。膜孔径0.2um，做不出来，要崩溃了。。。。

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