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wxk19960113

金虫 (小有名气)

[求助] 做wb,一抗选择,求大神指导 已有5人参与

新手做wb,检测某低等生物特定蛋白的表达情况,该如何选择一抗,(一般抗体都是鼠源,兔源。比如检测小鼠体内某蛋白,一抗可用兔抗鼠,)如果我检测的生物也用兔抗鼠,那么该生物和鼠的同源性至少应该多高?除同源性外,还需注意什么?

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SAM001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wxk19960113: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-03-30 21:13:31
一抗一般是鼠、兔、羊等生物来源,如果你要用兔抗鼠,那么你的蛋白最好是与鼠蛋白同源性较高、与兔同源性低的,可以通过文献看看其他人怎么做,用什么抗体,这是最好了。除了同源性还要注意抗体浓度,质量啥的。
你完全可以拿到蛋白自己去打老鼠或者兔子,获得满意的抗体

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2015-03-29 12:42:58
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wxk19960113: 金币+2, 有帮助 2015-03-30 00:56:15
Western_Blot详解(原理、分类、试剂、步骤及问题解答)
http://www.doc88.com/p-314883502286.html
求助:关于western blot一抗二抗的选择
http://www.360doc.com/content/10/0707/16/850939_37455264.shtml
3楼2015-03-29 13:18:25
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叶晓波1572

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wxk19960113: 金币+1, 有帮助 2015-03-30 21:04:17
赞同一楼的观点  像楼主这种情况  确实可以自己制备抗体 兔多抗2-3个月就可以了  自己没有条件的话  抗体制备的技术服务也很多 一般3000左右吧
4楼2015-03-30 11:29:01
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wxk19960113

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by SAM001 at 2015-03-29 12:42:58
一抗一般是鼠、兔、羊等生物来源,如果你要用兔抗鼠,那么你的蛋白最好是与鼠蛋白同源性较高、与兔同源性低的,可以通过文献看看其他人怎么做,用什么抗体,这是最好了。除了同源性还要注意抗体浓度,质量啥的。
你 ...

在ncbi做blast,比对结果与鼠同源性大概80%,可以用吗

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2015-03-30 20:59:35
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lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wxk19960113: 金币+2, 有帮助 2015-03-31 09:18:51
商品化的抗体一般会给出具体的抗原肽段,这一段最好完全一致。有些单抗没有给出的就只能试了。抗体结合的实际抗原肽段很短的,两个蛋白相似性再高这段不一致也不行。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2015-03-31 08:03:35
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wxk19960113: 金币+2, 有帮助 2015-04-01 22:40:47
我是在公司制备的,人家直接给我推荐兔源,说免疫系统比鼠更成熟
踏实
7楼2015-04-01 21:35:38
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