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工大新年

新虫 (小有名气)

[求助] 求指导 三个月没有出来 求各位大神指导

1.细胞裂解我用的RIPA裂解液强裂解的细胞半小时,加入了蛋白酶抑制剂  99比1
12%跑胶发现小分子蛋白条带很弱。目的蛋白HO-1 28KD
2 WB转膜MARKER可以看到转的很漂亮 NC膜 11V 14分钟,封闭 2,6,8,9小时都试过,一抗4度过夜,洗膜3次每次10分钟。2抗两小时,洗膜三次每次10分钟,有时一两小时,一抗1比500 1000都试过,二抗1比1000 2000也试过 发现压片内参 目的蛋白从来没有出来过
求大神指导
用丽春红染色转膜转上去了
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小角色大用途

新虫 (正式写手)

11V  14min,不知楼主后来问题有没有解决。。。最近15kD左右的蛋白一直出不来,200mA  25min, 30min , 60min都试过,因为开始内参也是出不来,后来调了电流就出来了,目的蛋白出不来。。。膜孔径0.2um,做不出来,要崩溃了。。。。
2楼2017-06-18 19:16:07
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