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夏天的普洱茶木虫 (著名写手)
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难道这个问题真的没有人遇到过吗？ 已有1人参与
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最近在做毕赤酵母表达，pGAPZ ALHPA A这个载体，菌株是SMD1168H。筛选以后提了酵母基因组，PCR也扩到了条带，但是问题出现了，这些菌落在平板上是有酶活的，试了三种底物，都证明在平板上有酶活。但是液体发酵，试了YPDS,YEPG,YNB BMGW培养基，碳源用了Lactose,glucose,sorbitol,从第一天开始摇瓶，测了21天没测到酶活，不存在没有分泌的可能，因为胞外胞内全测了。折腾了快半年了，老板说他从来没遇到过这种情况，我就想知道，难道真的没有人遇到过么？ 对了，还浓缩了上清，做了SDS-PAGA 和HIS-TAG INVISION STAIN，全都弥散，没有条带。如果真没压根就没产蛋白，那平板上三种不同底物的酶活是哪里来的？ |
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