应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白质纯化
121/2返回列表12下一页
查看: 1492  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tongqingjia

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质纯化 已有3人参与

研究的是带有GST标签的融合蛋白，柱上切收集的蛋白浓缩后（1ml左右），跑胶出现多条杂蛋白带，是不是蛋白液浓缩体积很少时，很多非目的蛋白的条带都会出现？急需指导，麻烦虫子们给予帮助吧，谢谢谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-04-01 09:22:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wanglele87

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-04-02 23:35:04
引用回帖:
3楼: Originally posted by tongqingjia at 2015-04-01 10:21:36
柱材料是4FF,而且过夜结合，柱上切之后，将收集的蛋白重新反挂柱除去GST，是不是利用亲和柱纯化效果不如分子筛 之类的？...

GST特异性比较好，一般过完是会比较纯的，可能会有一些单独的tag。不过我一般不会柱上切，回elute下来再切。分子筛一般纯化效果不好，除非蛋白分子量差别比较大，用来换buffer，一般作为最后一步纯化。楼主先换掉gsh，反挂下gst柱试试，不行的话试试离子柱。有的时候可能是蛋白折叠的问题，常常会粘一些杂蛋白，不好分开。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
一生不羁放纵爱自由
4楼2015-04-01 11:04:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wanglele87

金虫 (著名写手)
这个问题我竟不知如何回答。不纯只能说过得亲和竹效果不好，再试试离子柱分子筛的看看吧

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

tongqingjia
一生不羁放纵爱自由
2楼2015-04-01 09:41:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongqingjia

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wanglele87 at 2015-04-01 09:41:31
这个问题我竟不知如何回答。不纯只能说过得亲和竹效果不好，再试试离子柱分子筛的看看吧

柱材料是4FF,而且过夜结合，柱上切之后，将收集的蛋白重新反挂柱除去GST，是不是利用亲和柱纯化效果不如分子筛 之类的？
赞一下 回复此楼
3楼2015-04-01 10:21:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongqingjia

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wanglele87 at 2015-04-01 11:04:54
GST特异性比较好，一般过完是会比较纯的，可能会有一些单独的tag。不过我一般不会柱上切，回elute下来再切。分子筛一般纯化效果不好，除非蛋白分子量差别比较大，用来换buffer，一般作为最后一步纯化。楼主先换掉g ...

非常感谢你的回答，希望以后还可以请教你。
赞一下 回复此楼
5楼2015-04-01 19:55:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lirol

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tongqingjia: 金币+5, ★有帮助 2015-04-02 13:19:33
楼主有没有考虑过是蛋白不完全表达导致的杂带呢，大一点的tag好像会比较容易出现不完全表达的~另外过完柱子可以多用buffer洗洗的~
赞一下 回复此楼
6楼2015-04-02 11:01:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mataomatao

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tongqingjia: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-02 13:26:24
本帖内容被屏蔽
7楼2015-04-02 11:20:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongqingjia

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lirol at 2015-04-02 11:01:23
楼主有没有考虑过是蛋白不完全表达导致的杂带呢，大一点的tag好像会比较容易出现不完全表达的~另外过完柱子可以多用buffer洗洗的~

不完全表达是指不具有标签那种结合柱材料的能力的蛋白么？本来并非生物专业，希望耐心详细解答，非常感谢

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2015-04-02 13:23:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongqingjia

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by mataomatao at 2015-04-02 11:20:50
控制结合时间和结合时的柱材料的量；还有就是没有切之前可弄纯了？如果后面没有降解之类的；目标蛋白除了回挂有没有其他比如分子筛分离？

好的，谢谢！我会采纳您的建议，我们是柱上切之后，将收集的蛋白液重新挂柱使标签除的更干净，其他分子筛之类的就没有用过了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
9楼2015-04-02 13:26:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lirol

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
tongqingjia: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-03 09:14:35
引用回帖:
8楼: Originally posted by tongqingjia at 2015-04-02 13:23:06
不完全表达是指不具有标签那种结合柱材料的能力的蛋白么？本来并非生物专业，希望耐心详细解答，非常感谢
...

你的需要的是GST-protein，但是表达出来的有可能是GST-part of protein，仍然是有结合beads的能力，所以后面有可能会很杂；我之前出现过这种情况，后来把诱导温度降低之后改善了很多~
赞一下 回复此楼
10楼2015-04-02 14:27:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tongqingjia 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 311求调剂 +4 勇敢的小吴 2026-03-20 4/200 2026-03-25 18:12 by xcjcqu
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 材料与化工考研调剂 +9 孅華 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:09 by cmz0325
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 271求调剂 +4 生如夏花… 2026-03-22 4/200 2026-03-25 11:25 by userper
[考研] 化学调剂 +6 yzysaa 2026-03-21 6/300 2026-03-25 09:27 by aa331100
[考研] 材料学求调剂 +6 Stella_Yao 2026-03-20 6/300 2026-03-25 00:37 by baoball
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 305分求调剂（食品工程） +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭