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孟怀

新虫 (小有名气)

[交流] 状态很好的贴壁细胞刚换完液几分钟就大量的萎缩漂起来了,新人求指导!!!!

一起给4瓶T75汇合度为百分之八九十状态很好的贴壁细胞CHO换液,换完液后4四五分钟有大量细胞萎缩,竖起瓶子后细胞成片大量掉下来,我不知道这是什么情况,求广大同行前辈们帮我分析下,感激不尽!!!这个细胞是在此次换液前一天传的代,换液时90%为长梭形,像竹叶,状态很好。因为实验时间的问题此次换液直接用了从4℃冰箱拿出来的PBS和培养基,每瓶用PBS润洗3遍后才一起加的培养基,加液用的是电子移液枪。我不知道是不是低温PBS和培养基的问题?还是我换液操作的问题(每瓶洗三遍后再洗下一瓶)?或者说是其他原因?

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孟怀
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孟怀

新虫 (小有名气)

求版主帮顶!!!谢谢!

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孟怀
2楼2015-03-29 01:34:18
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zhaoyingjun

铁杆木虫 (职业作家)


孟怀: 金币+1 2015-03-29 23:43:30
不懂哦
一起努力,共同进步
3楼2015-03-29 01:53:45
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阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
孟怀: 金币+1 2015-03-29 23:43:04
路过的看了一下,帮顶,祝福好运!~~~~~~~~~~~~~~~~~~
自强不息,厚德载物;独立精神,自由思想。
4楼2015-03-29 07:18:31
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hbl215

金虫 (文坛精英)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
孟怀: 金币+5 2015-03-29 23:42:54
是在试验中么,这个汇合度应该传代了呀。4度的培养基对细胞会有影响,但不应该影响这么大,CHO是很皮实,贴壁比较牢的细胞,PBS洗三遍这有点多了,因不知道你是否是实验需要彻底换液,一般换液弃去旧培养基,换上新的就可以了。然后细胞怕被吹干,从你的描述看可能是你操作过程,细胞在没有PBS或培养基的情况下比较久,再加低温的影响,导致细胞死亡,细胞弃去液体,最好马上就补上液体。
5楼2015-03-29 12:50:52
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孟怀

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by hbl215 at 2015-03-29 12:50:52
是在试验中么,这个汇合度应该传代了呀。4度的培养基对细胞会有影响,但不应该影响这么大,CHO是很皮实,贴壁比较牢的细胞,PBS洗三遍这有点多了,因不知道你是否是实验需要彻底换液,一般换液弃去旧培养基,换上新 ...

谢谢您,有可能真是细胞干涸太久外加低温刺激使细胞萎缩漂浮了。这是实验室以前构建好的工程细胞,用于表达目的蛋白的。我前面在汇合度为90%以上的时候换先换5%血清培养基养一两天在换无血清培养基静息产蛋白的,连样5、6天都没问题。PBS洗三遍是因为我每次换完液后都还有少数漂浮的细胞。
孟怀
6楼2015-03-29 23:42:44
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