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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » miRNA提取加入酸苯酚氯仿后不分层或出现大量白色悬浮物怎么办？
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慕千雪

新虫 (初入文坛)

[求助] miRNA提取加入酸苯酚氯仿后不分层或出现大量白色悬浮物怎么办？ 已有2人参与

如题，小女子用的Axygen的miRNA提取试剂盒，HepG2细胞。加酚氯仿离心后，要么不分层，要么分层，但是有大量白色悬浮物质，根本无法吸取足够的上清液（见附图）。
重复了好多次实验呐，都是这个问题，简直要崩溃。。。。
师姐用相同的试剂盒提取时没有碰到这个问题，自己做时就总是这样，好伤心~~~~(>_<~~~~
不知有木有碰到类似情况的，为啥会这样啦？怎么解决的呢？

miRNA提取加入酸苯酚氯仿后不分层或出现大量白色悬浮物怎么办？
IMG_20150326_211138.jpg
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1楼 2015-03-26 22:55:56
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
慕千雪: 金币+4, ★有帮助, 非常感谢！我一直是按方法一操作的，方法二可以尝试一下 2015-03-30 11:52:14
方法一：倒掉旧的培养基，再用已经高压灭菌过的PBS洗1－2次，在吹打下HepG2细胞。
方法二；吸取全部的上清，用0.22的过滤器直接过滤。miRNA不受过滤影响。
祝你成功。
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-03-27 10:06:23
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whwei321

至尊木虫 (职业作家)

小虫

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
慕千雪: 金币+1 2015-03-27 09:48:26
离心速度加大13000转，时间延长30分′试一下

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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坚持就是胜利
2楼2015-03-26 23:40:03
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慕千雪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by whwei321 at 2015-03-26 23:40:03
离心速度加大13000转，时间延长30分′试一下

木有用的说。。。有几次看到有那么大一块白色的东西，就涡旋、静置，重新拿去离心，然后干脆连原来就有的分层也不分了。。。
不知道那坨白色的是什么啊，按理说加了酚氯仿无论怎样都该分层吧，可是居然再次混匀离心有不分层了。。。
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3楼2015-03-27 09:48:15
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-27 10:06:23
方法一：倒掉旧的培养基，再用已经高压灭菌过的PBS洗1－2次，在吹打下HepG2细胞。
方法二；吸取全部的上清，用0.22的过滤器直接过滤。miRNA不受过滤影响。
祝你成功。

还有替换方法三，HepG2细胞是人肝癌细胞，如果你要的是人miRNA，你大可以用其他细胞，或人自己血液中的白细胞，也能得到28S和18S.
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采菊东篱下，悠然见南山。
5楼2015-03-27 10:13:22
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