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2015年3月starseacow文献分享 (总第25期)
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starseacow
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接下来分享一篇PLANT CELL上的文章,为了便于理解,我将这篇文章之前工作发表的论文也列出来。 Arabidopsis Sec1/Munc18 protein SEC11 is a competitive and dynamic modulator of SNARE binding and SYP121-dependent vesicle traffic. Karnik R, Grefen C, Bayne R, Honsbein A, Köhler T, Kioumourtzoglou D, Williams M, Bryant NJ, Blatt MR. Plant Cell. 2013 Apr;25(4):1368-82 Binding of SEC11 Indicates Its Role in SNARE Recycling after Vesicle Fusion and Identifies Two Pathways for Vesicular Traffic to the Plasma Membrane Rucha Karnik, Ben Zhang, Sakharam Waghmare, Christin Aderhold, Christopher Grefen, Michael R Blatt The Plant Cell doi: http://dx.doi.org/10.1105/tpc.114.134429 这两篇文章主要探讨的是SEC11蛋白在调节SNARE蛋白功能中的作用。正如上面的帖子里提到,位于目标膜和转运泡膜上的SNARE蛋白相互结合结成复合体促进膜融合。而SEC11,是Sec1/Munc18家族的蛋白,这种蛋白也在细胞内囊泡运输及膜融合中发挥作用。这两篇文章解释的就是这种作用是什么。 第一篇文章(2013)中运用pull-down及BiFC技术,证明SEC11可以直接和SNARE家族中的一员SYP121发生直接相互作用。同时,为了研究这种相互作用对细胞内运输的影响,作者利用了一种traffic rescue技术。这种技术是在植物细胞内表达secYFP(一种会从ER分泌到膜外的荧光蛋白)以及作为参照的GFP。同时过表达要研究的目的蛋白。正常情况下,secYFP会被分泌到胞外,因此在细胞内只能看到GFP信号。如果过表达的目的蛋白干扰了囊跑运输,secYFP就会被截留在细胞内,因此可以看到YFP信号。通过YFP与GFP信号比值,可以获得一个参数表征细胞内转运情况。该比值升高,意味着正常运输被干扰,即traffic block,若比值降低,则意味着运输恢复,称为traffic rescue。结合这个技术,这篇文章证实SEC11参与调节SYP121参与的囊泡运输,同时SEC11 既可以与单独存在的SYP121发生相互作用以保证它处于未激活状态,避免不需要的SNARE蛋白复合体形成,同时,在SNARE形成复合体后,可以与复合体发生相互作用以稳定复合体的存在(结论在下面的cartoon里展示出来)。 图片2.jpg 第二篇文章是基于第一篇进行的深入研究。在拟南芥中,存在着63个SNARE蛋白,其中一些蛋白之间功能高度相似,譬如位于细胞膜上的SYP121\SYP122,位于转运泡上的VAMP721\VAMP722。那么,植物细胞是怎么选择哪对蛋白组成复合体呢?这篇文章利用前面提到的pull-down,BiFC以及基于酵母的mbSUS技术,研究了蛋白相互作用及复合体形成,利用traffic rescue技术展示不同蛋白过表达对细胞转运的影响。在syp121及syp122敲除突变体植物上进行研究。发现SEC11选择性的与SYP121而不是SYP122结合,以促进正确的SNARE复合体形成,同时,在该复合体解开时,SEC11也发挥了重要的作用。(这篇文章巨复杂,就像下面贴出来的总结cartoon里展示的,所以细节就不赘述了,感兴趣的虫友可以自己去看看) 图片1.jpg |
2楼2015-03-22 00:22:34
starseacow
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lilyjun23楼
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