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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

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[求助] 蛋白原核表达已有3人参与

最近在做蛋白质原核表达，目的蛋白80KD ，选用pGEX-4T-1载体、21度、终浓度0.1mM IPTG 诱导过夜，SDS-PAGE发现上清中也有蛋白，但是表达量不多
，将得到的上清蛋白和GST beads 孵育，蛋白几乎不和GST-beads 结合。请问是什么原因？

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岁月静好

1楼 2015-03-21 17:23:20

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781055707

木虫 (著名写手)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by Phoebe.Lee at 2015-03-21 17:36:26
沉淀里也有和上清比量差的不是特别多同学说我的诱导条件不是很理想要再摸下我的主要疑问是为什么GST beads 拉不下来融合蛋白是不是诱导温度高了导致蛋白折叠错误影响和beads 结合？...

也有可能不是拉不下来，可能是没结合上去。GST beads 上洗下来的废液可以都跑下SDS