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flll2014

铜虫 (小有名气)

[交流] 蛋白表达纯化问题 已有5人参与

去年做的原核表达,成功构建了表达菌株,诱导表达量很高,纯化效果也较好,就保了菌种,今年直接将菌种活化了,也做pcr鉴定了,再诱导表达怎么表达量变得很低,不知道为什么,而且纯化也没纯化出来,请大家帮帮忙,谢谢!
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wanglele87

金虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
重新转化吧。菌种时间长了质粒丢失或者状态不好了。

[ 发自小木虫客户端 ]
一生不羁放纵爱自由
16楼2015-03-16 12:02:07
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查看全部 19 个回答

pennchem

专家顾问 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
重新转质粒,挑选单克隆,从头再做一遍表达纯化
行至水穷处,坐看云起时
2楼2015-03-12 14:31:46
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lomis

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
菌株退化了,可涂抗性版挑几个单克隆再表达,如都较低,再重新构建载体转化。
没有命运,只有选择!
3楼2015-03-12 15:14:37
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flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lomis at 2015-03-12 15:14:37
菌株退化了,可涂抗性版挑几个单克隆再表达,如都较低,再重新构建载体转化。

原先构建的载体质粒也保存了,重新转化会不会好些
4楼2015-03-12 16:20:02
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