| 查看: 1074 | 回复: 1 | ||
[求助]
请教酵母异源表达过程中Na+、K+离子的吸收动力学实验做法
|
|
克隆了一个基因，在酵母中用CY162和G19突变体分别验证其介导K+、Na+吸收的功能，初步证明该基因介导K+吸收，能恢复CY162在低K+培养基上的生长，同时不增加G19对Na+的敏感性，且在高Na+培养基上，由于其介导K+吸收，因此使G19长势更好。现在想做酵母K+吸收动力学实验，但具体过程不是特别清楚。 从文献里看到有两种方法： 1）用液体AP培养基扩大培养酵母转化菌株，之后经过无K的AP培养基K+饥饿处理后，添加含K的AP培养基，振荡培养，每隔一段时间取样，离心后，用原子分光光度子测定上清中的K+含量。这个方法比较简单，我最初就是这么做，进行的Na+消耗实验。先用液体AP过夜培养，于第二天离心后，将同时做的好几份样品混合，使其OD值达到1，然后向AP培养基中添加10mM NaCl，于0、10、30min，后每隔30min取样，离心后取上清测定介质中Na+含量。连续监控了6 h，介质中Na+含量根本不发生一丝丝变化。我想是不是提供的Na+浓度过高，培养的时间过短？参考的是测定K+的方法，但我测定的是Na+，看到文献中用同样的方法测定K+时很多也是用了6h得到的。 2）是测定酵母细胞内的K+含量，要经过过膜，萃取等相对繁琐的过程。 友友们，能不能给我提供下详细的实验方法，以及过程中的注意事项，不胜感激！毕业季，补实验，做不出来就无缘毕业了……跪求！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有192人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
2楼2022-09-01 23:28:48
