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[求助]
请教酵母异源表达过程中Na+、K+离子的吸收动力学实验做法
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克隆了一个基因，在酵母中用CY162和G19突变体分别验证其介导K+、Na+吸收的功能，初步证明该基因介导K+吸收，能恢复CY162在低K+培养基上的生长，同时不增加G19对Na+的敏感性，且在高Na+培养基上，由于其介导K+吸收，因此使G19长势更好。现在想做酵母K+吸收动力学实验，但具体过程不是特别清楚。 从文献里看到有两种方法： 1）用液体AP培养基扩大培养酵母转化菌株，之后经过无K的AP培养基K+饥饿处理后，添加含K的AP培养基，振荡培养，每隔一段时间取样，离心后，用原子分光光度子测定上清中的K+含量。这个方法比较简单，我最初就是这么做，进行的Na+消耗实验。先用液体AP过夜培养，于第二天离心后，将同时做的好几份样品混合，使其OD值达到1，然后向AP培养基中添加10mM NaCl，于0、10、30min，后每隔30min取样，离心后取上清测定介质中Na+含量。连续监控了6 h，介质中Na+含量根本不发生一丝丝变化。我想是不是提供的Na+浓度过高，培养的时间过短？参考的是测定K+的方法，但我测定的是Na+，看到文献中用同样的方法测定K+时很多也是用了6h得到的。 2）是测定酵母细胞内的K+含量，要经过过膜，萃取等相对繁琐的过程。 友友们，能不能给我提供下详细的实验方法，以及过程中的注意事项，不胜感激！毕业季，补实验，做不出来就无缘毕业了……跪求！ |
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2楼2022-09-01 23:28:48