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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 液质联用测脱氧核苷三磷酸响应值降低！特别低！
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JiMiao_2015

新虫 (初入文坛)

[求助] 液质联用测脱氧核苷三磷酸响应值降低！特别低！

最近在建立液相质谱测细胞内脱氧核苷三磷酸，但是响应值特别低。最开始试的时候用的是500 ng/mL的标准品，MRM都有 10^3左右，结果后来氮气用完了新的一直没来，中间断气了三天之后就一直响应值特别低，autotune后，其他人用ESI positive都正常了，结果我这个用ESI negative的还是只有一百多，提高了十倍浓度照样只有两三百，最开始试的时候用连接柱不上色谱柱都有10^3的。已经试过不同pH的流动相，从sigma买了新的标准品，换过配样品的溶剂等等，一直没啥改善，求各位大侠指点迷津！谢谢！
用的是Agilent 6410，ESI negative，Phenomenex Luna Aminopropyl做HILIC，流动相是20mM NH4Ac pH 9.45和乙腈，流速0.2 mL／min，Gas Temp 300 C，Gas Flow 10L/min，Nebulizer 25 psi，Capillary Negative 3000V。
新手，木有多少金币，全给了哈，再次感谢！
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1楼 2015-03-04 07:26:37
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
我建议你发个图看看。
另外，20mM的乙酸铵浓度太高了，通常情况下最高不超过10mM，还有pH9.45是不是太高了。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
8楼2015-03-05 12:39:50
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普通回帖

一枝潇洒

新虫 (初入文坛)
把autotune报告调出来看看，是不是调谐的时候没有选中Negative模式，只做了Positive。
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2楼2015-03-04 09:06:56
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JiMiao_2015

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 一枝潇洒 at 2015-03-04 09:06:56
把autotune报告调出来看看，是不是调谐的时候没有选中Negative模式，只做了Positive。

谢谢回复，autotune Negative和Positive都做了，都在正常范围来着
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3楼2015-03-04 21:04:02
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sun0549

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提高进样量，还有，你来新氮气后平衡仪器了吗？要平衡几个小时再用~~~~感觉像是仪器灵敏度不高了。。。
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4楼2015-03-04 21:35:31
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JiMiao_2015

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sun0549 at 2015-03-04 21:35:31
提高进样量，还有，你来新氮气后平衡仪器了吗？要平衡几个小时再用~~~~感觉像是仪器灵敏度不高了。。。

谢谢回复，平衡了，当时新氮气来了之后平衡了大概有三个多小时但是进什么标准品都不出峰，做了autotune之后，positive mode的标准品响应值和之前差不多，但是脱氧核苷三磷酸的标准品怎么都不行，进样量提高到50 uL，浓度到5000 ng/mL，还是只有六七百，实在不知道怎么回事了
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5楼2015-03-04 23:59:54
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sun0549

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
JiMiao_2015: 金币+3, ★有帮助, 洗了还是低，Agilent那边也说洗了再看的 2015-04-03 03:15:54
引用回帖:
5楼: Originally posted by JiMiao_2015 at 2015-03-04 23:59:54
谢谢回复，平衡了，当时新氮气来了之后平衡了大概有三个多小时但是进什么标准品都不出峰，做了autotune之后，positive mode的标准品响应值和之前差不多，但是脱氧核苷三磷酸的标准品怎么都不行，进样量提高到50 uL ...

洗一下离子源和喷雾针，用点热水充分清洗管路，再测。如果还不行就换个流动相的缓冲盐，用50mM甲酸铵试试~~~

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2015-03-05 08:17:23
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jinianwei

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是液相方法平衡的时间太短了，Hilic挺难平衡的，要不要多平衡下柱子，再试试
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人生需要努力
7楼2015-03-05 12:35:28
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JiMiao_2015

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sun0549 at 2015-03-05 08:17:23
洗一下离子源和喷雾针，用点热水充分清洗管路，再测。如果还不行就换个流动相的缓冲盐，用50mM甲酸铵试试~~~
...

谢谢，我试试看
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9楼2015-03-05 23:20:38
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JiMiao_2015

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jinianwei at 2015-03-05 12:35:28
是不是液相方法平衡的时间太短了，Hilic挺难平衡的，要不要多平衡下柱子，再试试

谢谢回复，基本上平衡有一个小时来着，刚开始进的样的和后来的也没啥区别
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10楼2015-03-05 23:21:58
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