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wodejiapple

铜虫 (正式写手)

[交流] 合成的单链DNA作为扩增子,产物有非目的条带

大家好,我从合成公司合成了90-100 nt长的DNA作为扩增子,结果PCR产物有非目的条带,每次都有,这是为什么呀?
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勤奋的鱼

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能是设计的引物不专一
厚积薄发,莫等闲
2楼2015-01-24 15:13:52
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Jacob_24

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wodejiapple(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-24 20:47:02
有两种可能
1,合成的片段有问题不纯;
2,有非特异扩增,应该是引物的特异性不好;可以尝试重新设计
CCC
3楼2015-01-24 17:27:32
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781055707

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小片段很难克服的,你拿它和阴性比比,亮度很明显的话,就是批出来了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
采菊东篱下,悠然见南山。
4楼2015-01-26 00:29:22
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
每次都有非特异性条带,说明体系出了问题呗!
合成的模板纯度,引物设计的是否合理,反应的条件,使用的酶(普通的Taq酶,热启动酶,高保真酶)
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
5楼2015-01-27 10:13:04
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