【答案】应助回帖

11楼2015-01-25 17:46:39

芕星悦

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10楼: Originally posted by qsy1115 at 2015-01-25 17:05:01
单独跑下模板试试，看是否模板讲解，一般taq酶去扩应该都没啥问题的

你说的单独跑下模板是什么意思？就是利用胶检测DNA吧？

12楼2015-02-02 10:24:13

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9楼: Originally posted by 水无月小白 at 2015-01-23 09:29:35
只能说可能是水的问题了而且是不是有可能是因为模板浓度太高导致效率过低

20ul体系中，DNA浓度为30ng，高么？在国内的时候，我直接用的DNA母液，浓度一般在50ng/ul-100ng/ul，20ul体系中用2ul，那个跑的完全没问题。

13楼2015-02-02 10:26:38

芕星悦

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9楼: Originally posted by 水无月小白 at 2015-01-23 09:29:35
只能说可能是水的问题了而且是不是有可能是因为模板浓度太高导致效率过低

感觉像是两次过滤的水，不知道算不算去离子水。是不是可以利用电导仪来测一下水的离子浓度，如果基本为0，就说明水没问题了？

14楼2015-02-02 10:29:53

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7楼: Originally posted by 立林258369 at 2015-01-23 00:25:30
可以尝试将酶含量提高，加大模板量到100ng。预混的也是这些，可以参考一下它的配比

你们用后染色法么？琼脂糖凝胶，利用后染色法（EB为核酸染料），总感觉染色效果也不太好。你们那里用什么染色？

15楼2015-02-02 10:32:05

匿名

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16楼2015-02-02 12:06:43

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浅语8905

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【答案】应助回帖

知道是什么原因了吗？

17楼2015-02-02 12:34:11

芕星悦

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17楼: Originally posted by 浅语8905 at 2015-02-02 12:34:11
知道是什么原因了吗？

还不清楚，有点消极了。买了新的mix和Taq，结果还是不稳定，只跑出来一次，效果也不好。打算从水着手调查了。

18楼2015-02-02 22:39:50

浅语8905

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18楼: Originally posted by 芕星悦 at 2015-02-02 22:39:50
还不清楚，有点消极了。买了新的mix和Taq，结果还是不稳定，只跑出来一次，效果也不好。打算从水着手调查了。...

尽然跑出来过，那是不是PCR仪的问题呢，你可以试试换个仪器试试，多做对照

19楼2015-02-03 08:53:19

leannele

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【答案】应助回帖

加大dntp的量，使用镁离子和buffer分开的缓冲液，模板不要加很多。

20楼2015-02-03 14:56:27