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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助PCR扩增不出来的问题.....
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jennymxz

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主是否做了阳性、阴性对照？结果怎么样？
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11楼2015-01-25 17:46:39
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芕星悦

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by qsy1115 at 2015-01-25 17:05:01
单独跑下模板试试，看是否模板讲解，一般taq酶去扩应该都没啥问题的

你说的单独跑下模板是什么意思？就是利用胶检测DNA吧？
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12楼2015-02-02 10:24:13
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芕星悦

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 水无月小白 at 2015-01-23 09:29:35
只能说可能是水的问题了 而且 是不是有可能是因为模板浓度太高 导致效率过低

20ul体系中，DNA浓度为30ng，高么？在国内的时候，我直接用的DNA母液，浓度一般在50ng/ul-100ng/ul，20ul体系中用2ul，那个跑的完全没问题。
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13楼2015-02-02 10:26:38
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芕星悦

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 水无月小白 at 2015-01-23 09:29:35
只能说可能是水的问题了 而且 是不是有可能是因为模板浓度太高 导致效率过低

感觉像是两次过滤的水，不知道算不算去离子水。是不是可以利用电导仪来测一下水的离子浓度，如果基本为0，就说明水没问题了？
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14楼2015-02-02 10:29:53
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芕星悦

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 立林258369 at 2015-01-23 00:25:30
可以尝试将酶含量提高，加大模板量到100ng。预混的也是这些，可以参考一下它的配比

你们用后染色法么？琼脂糖凝胶，利用后染色法（EB为核酸染料），总感觉染色效果也不太好。你们那里用什么染色？
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15楼2015-02-02 10:32:05
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匿名

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16楼2015-02-02 12:06:43
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浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

知道是什么原因了吗？
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17楼2015-02-02 12:34:11
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芕星悦

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 浅语8905 at 2015-02-02 12:34:11
知道是什么原因了吗？

还不清楚，有点消极了。买了新的mix和Taq，结果还是不稳定，只跑出来一次，效果也不好。打算从水着手调查了。
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18楼2015-02-02 22:39:50
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浅语8905

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 芕星悦 at 2015-02-02 22:39:50
还不清楚，有点消极了。买了新的mix和Taq，结果还是不稳定，只跑出来一次，效果也不好。打算从水着手调查了。...

尽然跑出来过，那是不是PCR仪的问题呢，你可以试试换个仪器试试，多做对照
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19楼2015-02-03 08:53:19
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leannele

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

加大dntp的量，使用镁离子和buffer分开的缓冲液，模板不要加很多。
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20楼2015-02-03 14:56:27
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