| 查看: 2073 | 回复: 22 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
求助PCR扩增不出来的问题..... 已有11人参与
|
||
|
最近做分子实验PCR，总是做不出来，不知道哪位大侠能够指点一下.... PCR反应总体系为20 ul，其中包含： DNA（10 ng/ul） 3ul ； Primers（2 uM）上下游各3ul； Taq酶（5U/ul） 0.2ul； dNTP（1mM） 4ul ； 10Xbuffer（含Mg2+，1Xbuffer中含2mM） 2ul； ddH2O补齐至20ul。 该体系用做扩增叶绿体DNA时，完全没问题，但是在扩增核基因时，仅扩增出一次，就再也没扩增出来了。从扩增效果看，也并不是特别理想。以前做的时候，是用的公司提供的预混液mix，只需加入DNA、primers、Taq，拿水补齐就行了，且扩增结果稳定。现在用同样的扩增程序，可扩增结果怎么都出不来。试了很多次，更换引物（新合成的引物）、增加引物浓度（终浓度为0.3、0.5、1uM的都试过）、更换dNTP、更换DNA、增加DNA模版浓度（体系中30ng、40ng、50ng的都试过），但最终都是无结果。PCR扩增程序没问题的，因为之前用预混液做出来有结果的。只是现在没有条件了，没有再购买预混液了。 另外，不知道水是不是有问题？我做叶绿体基因的时候，扩增结果良好，扩增图谱比较清晰，但用同样的体系，只是更换引物，没有更换水，结果怎么都做不出来了，求大神帮忙..... |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有110人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有6人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
浅语8905
新虫 (小有名气)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 436.1
- 帖子: 125
- 在线: 34小时
- 虫号: 3438071
- 注册: 2014-09-24
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
19楼2015-02-03 08:53:19
红卫大兵
木虫 (正式写手)
- 应助: 177 (高中生)
- 金币: 1875.1
- 散金: 174
- 红花: 8
- 帖子: 358
- 在线: 167.5小时
- 虫号: 2147864
- 注册: 2012-11-26
- 性别: GG
- 专业: 植物进化生物学
2楼2015-01-21 22:46:14
3楼2015-01-22 00:08:21
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
- MolEPI: 1
- 应助: 172 (高中生)
- 金币: 646.4
- 散金: 170
- 红花: 16
- 帖子: 863
- 在线: 144.9小时
- 虫号: 3603131
- 注册: 2014-12-19
- 专业: 抗体工程学
4楼2015-01-22 11:04:07
