应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重组质粒转到BL21（DE3）中用T7检测没条带，用特异引物检测有条带，怎么回事
51/1返回列表
查看: 2444  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒转到BL21（DE3）中用T7检测没条带，用特异引物检测有条带，怎么回事 已有5人参与

在做原核表达，构建的重组质粒pET-32a-L，双酶切大小正确，重组质粒用T7还有特异性引物检测都正确！但是转化到BL21(DE3)的时候长了满板的菌，挑了十个菌，用T7检测没有一个有条带，但是用特异引物检测都有，到底哪里出了问题？？？？后面换了别人做的感受态转化，结果两个板只长了一颗菌，怎么破？求各位大神指点，小女子不胜感激
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-01-21 10:01:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 781055707 at 2015-01-21 10:34:08
你目的片段多大呀，有400以上吗？...

我的基因的大小是1300bp左右，如果用T7检测的话应该在2000bp左右有条带。空载检测在700bp左右有条带
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2015-01-21 10:40:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ginnyzhuzhu: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-01-21 11:09:18
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-21 21:15:36
（用T7检测没有一个有条带，但是用特异引物检测都有），特异引物检测阴性有条带吗？没有的话，应该是连上了，可以提个质粒，双切验证一下，T7的引物坏了也是有可能的。BL21(DE3)这个感受态连上后，我的基本长的都很稀疏。二，三十个菌左右吧。（后面换了别人做的感受态转化，结果两个板只长了一颗菌，怎么破？）妥妥的没连上，有做没酶切的质粒转这个感受态吗？
赞一下(1人) 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-01-21 10:16:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ginnyzhuzhu: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-01-21 11:09:29
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-21 21:15:41
做个空白对照，看看空载体会不会跑出条带
赞一下 回复此楼
3楼2015-01-21 10:25:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-01-21 10:16:13
（用T7检测没有一个有条带，但是用特异引物检测都有），特异引物检测阴性有条带吗？没有的话，应该是连上了，可以提个质粒，双切验证一下，T7的引物坏了也是有可能的。BL21(DE3)这个感受态连上后，我的基本长的都很 ...

你是说用特异引物检测什么阴性对照啊？我就用了T7/T7ter还有特异性引物检测了挑的菌株，同时也检测了重组质粒！确定T7引物没有问题呀！我觉得构建的重组质粒应该是没问题的啊！现在到最后一步啦~直接提的重组质粒转化到表达菌了
赞一下 回复此楼
4楼2015-01-21 10:28:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 有没有大神帮我看看基金代码 28+4 1234567wang 2026-08-24 10/500 2026-08-25 19:15 by lfy8008
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 19/950 2026-08-25 17:57 by chick875
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +20 羊腰板 2026-08-21 23/1150 2026-08-25 16:34 by zsna
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 什么时候开奖？ +12 CrisMessi 2026-08-18 13/650 2026-08-25 14:40 by ZJTJZ
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭