应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重组质粒转到BL21（DE3）中用T7检测没条带，用特异引物检测有条带，怎么回事
51/1返回列表
查看: 2507  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒转到BL21（DE3）中用T7检测没条带，用特异引物检测有条带，怎么回事 已有5人参与

在做原核表达，构建的重组质粒pET-32a-L，双酶切大小正确，重组质粒用T7还有特异性引物检测都正确！但是转化到BL21(DE3)的时候长了满板的菌，挑了十个菌，用T7检测没有一个有条带，但是用特异引物检测都有，到底哪里出了问题？？？？后面换了别人做的感受态转化，结果两个板只长了一颗菌，怎么破？求各位大神指点，小女子不胜感激
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-01-21 10:01:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ginnyzhuzhu: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-01-21 11:09:29
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-21 21:15:41
做个空白对照，看看空载体会不会跑出条带
赞一下 回复此楼
3楼2015-01-21 10:25:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ginnyzhuzhu: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-01-21 11:09:18
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-21 21:15:36
（用T7检测没有一个有条带，但是用特异引物检测都有），特异引物检测阴性有条带吗？没有的话，应该是连上了，可以提个质粒，双切验证一下，T7的引物坏了也是有可能的。BL21(DE3)这个感受态连上后，我的基本长的都很稀疏。二，三十个菌左右吧。（后面换了别人做的感受态转化，结果两个板只长了一颗菌，怎么破？）妥妥的没连上，有做没酶切的质粒转这个感受态吗？
赞一下(1人) 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-01-21 10:16:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-01-21 10:16:13
（用T7检测没有一个有条带，但是用特异引物检测都有），特异引物检测阴性有条带吗？没有的话，应该是连上了，可以提个质粒，双切验证一下，T7的引物坏了也是有可能的。BL21(DE3)这个感受态连上后，我的基本长的都很 ...

你是说用特异引物检测什么阴性对照啊？我就用了T7/T7ter还有特异性引物检测了挑的菌株，同时也检测了重组质粒！确定T7引物没有问题呀！我觉得构建的重组质粒应该是没问题的啊！现在到最后一步啦~直接提的重组质粒转化到表达菌了
赞一下 回复此楼
4楼2015-01-21 10:28:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by titus0805 at 2015-01-21 10:25:07
做个空白对照，看看空载体会不会跑出条带

空载用T7跑出条带了！没有用特异引物检测呢，你是说用特异引物检测一下看有没有条带吗
赞一下 回复此楼
5楼2015-01-21 10:30:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:14 by zNcEhTcH7ihq
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:50 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-15 16:47 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-15 15:50 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-15 15:27 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-15 15:14 by CgyNCDVNhGVg
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-15 14:13 by VMDqgnlKimtZ
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-15 14:02 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 09:38 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-15 05:22 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭