24小时热门版块排行榜    

查看: 1004  |  回复: 9
当前主题已经存档。

tcxuefeng

金虫 (正式写手)

[交流] TA克隆能直接用于表达载体吗?

我们实验室采用的常规方法是将PCR产物先利用TA克隆插入T载体,在从T载切下插入pET表达载体.
但是发现实验室保藏的pET29a(+)中同样有EcoRV酶切位点.于是向请教大家能否直接将PCR产物纯化后利用TA克隆一步插入到pET29a(+)表达载体?!有没有哪位朋友试过,效果怎样?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

11014612

银虫 (初入文坛)

★ ★
tcxuefeng(金币+2,VIP+0):谢谢讨论
不好吧 如果那样的话就没办法定向可隆了,而且连到表达载体后一般还要测序验证
2楼2008-06-03 21:16:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tcxuefeng

金虫 (正式写手)

谢谢.但是与常规构建表达载体的繁琐相比,TA克隆的高效性是否使得足以接受非定向克隆的缺点?
因为最早单酶切构建不也能够接受吗?
用表达载体直接TA克隆的可行性到底有多大呢.欢迎大家继续指点.
3楼2008-06-03 21:46:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouyj

木虫 (正式写手)

★ ★
tcxuefeng(金币+2,VIP+0):谢谢.
单酶切插入要考虑方向问题
并且可能会造成移码突变
建议楼主你在PCR引物中设计酶切位点,然后纯化直接酶切,和载体连接,省掉TA克隆,我们都是这样做的
有朋友们的支持,在学术道路上才不会寂寞
4楼2008-06-03 22:18:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mimisikai

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
tcxuefeng(金币+6,VIP+0):谢谢你.是我搞错了.我以为T载是环状的
不可以。T载体用是EcoRV位点 但其是切开后加T了 难道你也把pet-29切开 再加T?
不要省事,否则反而费时。
5楼2008-06-03 23:35:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maria229

木虫 (著名写手)

我用的transgen公司的pEASY-E1载体就是利用TA原理设计的表达载体,虽然不是pET29a(+),但是也是His标签的,直接连接后就能表达了,很好用的。他们还有E2,区别是His tag的位置不同。
6楼2008-06-04 18:37:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tcxuefeng

金虫 (正式写手)

谢谢楼上的朋友.
在请教,你用的这个载体价格如何?具体怎么购买呢.
7楼2008-06-05 09:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maria229

木虫 (著名写手)

20ul 几百块钱(不好意思,忘记具体数了),是北京全式金生物技术公司,电话是010-51296890,还有一个咨询热线 400-716-9321

好像有折扣的,祝你试验成功
8楼2008-06-11 09:18:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tcxuefeng

金虫 (正式写手)

谢谢你,朋友!
9楼2008-06-13 08:34:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ice-2008

金虫 (小有名气)

主要还是定向的问题吧
10楼2008-06-16 06:49:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tcxuefeng 的主题更新
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-13 11:11 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 9/450 2026-11-13 11:02 by Equinoxhua
[教师之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-13 04:21 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:51 by ECLTXnJnRSXf
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 5/250 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:20 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:00 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:41 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-12 10:38 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 11/550 2026-11-12 09:57 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-12 09:41 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 08:15 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 6/300 2026-11-12 07:09 by 9fOTqj074tIg
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 czAiolzR0IJC 2026-11-10 5/250 2026-11-12 06:36 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:30 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:19 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:08 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:00 by 9fOTqj074tIg
[考博] 申请环境,微生物方向博士 +3 浅笑09 2026-11-08 3/150 2026-11-10 12:44 by 可淡不可忘
信息提示
请填处理意见