24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 871  |  回复: 9
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

tcxuefeng

金虫 (正式写手)

[交流] TA克隆能直接用于表达载体吗?

我们实验室采用的常规方法是将PCR产物先利用TA克隆插入T载体,在从T载切下插入pET表达载体.
但是发现实验室保藏的pET29a(+)中同样有EcoRV酶切位点.于是向请教大家能否直接将PCR产物纯化后利用TA克隆一步插入到pET29a(+)表达载体?!有没有哪位朋友试过,效果怎样?
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouyj

木虫 (正式写手)

★ ★
tcxuefeng(金币+2,VIP+0):谢谢.
单酶切插入要考虑方向问题
并且可能会造成移码突变
建议楼主你在PCR引物中设计酶切位点,然后纯化直接酶切,和载体连接,省掉TA克隆,我们都是这样做的
有朋友们的支持,在学术道路上才不会寂寞
4楼2008-06-03 22:18:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

11014612

银虫 (初入文坛)

★ ★
tcxuefeng(金币+2,VIP+0):谢谢讨论
不好吧 如果那样的话就没办法定向可隆了,而且连到表达载体后一般还要测序验证
2楼2008-06-03 21:16:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tcxuefeng

金虫 (正式写手)

谢谢.但是与常规构建表达载体的繁琐相比,TA克隆的高效性是否使得足以接受非定向克隆的缺点?
因为最早单酶切构建不也能够接受吗?
用表达载体直接TA克隆的可行性到底有多大呢.欢迎大家继续指点.
3楼2008-06-03 21:46:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mimisikai

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
tcxuefeng(金币+6,VIP+0):谢谢你.是我搞错了.我以为T载是环状的
不可以。T载体用是EcoRV位点 但其是切开后加T了 难道你也把pet-29切开 再加T?
不要省事,否则反而费时。
5楼2008-06-03 23:35:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 332求调剂 +3 @MZB382400 2026-03-28 3/150 2026-03-28 16:55 by JourneyLucky
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 12:04 by 王保杰33
[考研] 291求调剂 +6 HanBeiNingZC 2026-03-24 6/300 2026-03-28 07:55 by baoball
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +15 荷包蛋hyj 2026-03-26 15/750 2026-03-28 04:13 by fmesaito
[考研] 315分求调剂 +7 26考研上岸版26 2026-03-26 7/350 2026-03-28 04:05 by fmesaito
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕,求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 266分求材料化工冶金矿业等专业的调剂 +4 哇呼哼呼哼 2026-03-26 4/200 2026-03-27 17:02 by zhyzzh
[考研] 283求调剂(080500) +4 A child 2026-03-27 4/200 2026-03-27 15:34 by XPU李庆
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分,英语已过四六级,六级521,求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
[考研] 求调剂 +6 林之夕 2026-03-24 6/300 2026-03-27 08:38 by hypershenger
[考研] 一志愿北化求调剂 +3 Jsman 2026-03-22 3/150 2026-03-26 21:06 by ajpv风雷
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 332求调剂 +6 032500 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:45 by 418490947
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315(英一)求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 300分,材料,求调剂,英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
信息提示
请填处理意见