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涅槃之曦

铁虫 (正式写手)

[求助] 我的cDNA.你在哪,怎么千呼万唤不出来 已有5人参与

用玉米幼苗提的RNA,反转录成CDNA.跑PCR一直没有条带,换了酶和温度梯度,还是不得行!恳求各位大师指点,小女子在此跪谢了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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涅槃之曦

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 1009238055 at 2015-01-16 20:35:26
刚刚想错了,以为你送CDNA去测序呢。那会不会是你的片段太长了哦,长片段的话,使用LA Taq酶效果会好很多哦。建议用其他的引物做个阳性对照验证一下你的模板和PCR的其他试剂。如果模板没有问题,用TOUCH DOWN PCR程 ...

都试了,还是跑不出来

[ 发自小木虫客户端 ]
19楼2015-01-16 21:04:43
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查看全部 32 个回答

晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-17 19:48:43
看来做玉米遇到难题的真不少啊。请问你的cDNA质量如何?有用Actin检测一下吗?如果cDNA质量好,那就需要优化体系去扩增你需要的目的基因了。
2楼2015-01-16 08:34:00
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
涅槃之曦(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-16 17:31:23
得到cDNA之后是否在短时间内就进行PCR了呢?如果酶和温度都尝试过的话,确认模板是否降解了,引物设计的是否合理。(反转录时的反转录酶也很重要的)
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-01-16 09:07:14
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涅槃之曦

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-16 08:34:00
看来做玉米遇到难题的真不少啊。请问你的cDNA质量如何?有用Actin检测一下吗?如果cDNA质量好,那就需要优化体系去扩增你需要的目的基因了。

CDNA质量还可以,元旦节提的,难道是降解了

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-01-16 09:44:21
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