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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 我的cDNA.你在哪，怎么千呼万唤不出来
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涅槃之曦

铁虫 (正式写手)

[求助] 我的cDNA.你在哪，怎么千呼万唤不出来 已有5人参与

用玉米幼苗提的RNA,反转录成CDNA.跑PCR一直没有条带，换了酶和温度梯度，还是不得行！恳求各位大师指点，小女子在此跪谢了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-01-15 23:38:26
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1009238055

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 涅槃之曦 at 2015-01-16 17:33:57
GC含量不高，cDNA里面没有内含子吧
...

刚刚想错了，以为你送CDNA去测序呢。那会不会是你的片段太长了哦，长片段的话，使用LA Taq酶效果会好很多哦。建议用其他的引物做个阳性对照验证一下你的模板和PCR的其他试剂。如果模板没有问题，用TOUCH DOWN PCR程序跑一下PCR，这种方法一般都比较靠谱的。如果这样还是不能扩增出来的话，可能就是玉米基因组测序的时候这个基因没有问题啦。
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18楼2015-01-16 20:35:26
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-17 19:48:43
看来做玉米遇到难题的真不少啊。请问你的cDNA质量如何？有用Actin检测一下吗？如果cDNA质量好，那就需要优化体系去扩增你需要的目的基因了。
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2楼2015-01-16 08:34:00
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
涅槃之曦(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-16 17:31:23
得到cDNA之后是否在短时间内就进行PCR了呢？如果酶和温度都尝试过的话，确认模板是否降解了，引物设计的是否合理。（反转录时的反转录酶也很重要的）
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-01-16 09:07:14
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涅槃之曦

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-16 08:34:00
看来做玉米遇到难题的真不少啊。请问你的cDNA质量如何？有用Actin检测一下吗？如果cDNA质量好，那就需要优化体系去扩增你需要的目的基因了。

CDNA质量还可以，元旦节提的，难道是降解了

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-01-16 09:44:21
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